pZf-gRNA、pgfvs-Cas9-HK1-gRNA和pgfvs-Cas9-HK2-gRNA BioVector NTCC质粒载体菌种细胞蛋白抗体基因保藏中心

pZf-gRNA、pgfvs-Cas9-HK1-gRNA和pgfvs-Cas9-HK2-gRNA 【Supplier来源】BioVector NTCC质粒载体菌种细胞蛋白抗体基因保藏中心www.biovector.net 【Description描述】采用酶切连接法和重叠延伸PCR的方法,构建了6个表达载体,分别是:pgfvs-Cas9、pHK1-gRNA、pHK2-gRNA、pZf-gRNA、pgfvs-Cas9-HK1-gRNA和pgfvs-Cas9-HK2-gRNA。(4)通过金针菇原生质体单核化,得到了3个单核菌株:D-A、D-C和D-D,通过对单核菌株出菇实验,得到单核菌株均能出菇,最终确定了转化所需的单核菌株为:D-C。通过潮霉素的抗性筛选,确定了金针菇菌丝体及原生质体对潮霉素的最低敏感浓度均为50μg/mL。(5)采用PEG介导的方法,将CRISPR/Cas9表达载体共转化金针菇原生质体,经过潮霉素初步筛选,PCR的鉴定后,总共有8个携带有HK1基因的载体的Cas9蛋白基因整合到了金针菇的基因组中,总共有4个携带HK2基因的载体的Cas9蛋白整合到了金针菇的基因组中。