BioVector® N/TERT-2G 人永生化角质形成细胞株技术档案 / BioVector® N/TERT-2G Human Immortalized Keratinocyte Cell Line Datasheet

一、 背景与来源说明 / Background & Origin

N/TERT-2G 是由正常人源皮肤表皮角质形成细胞（Primary Human Epidermal Keratinocytes, NHEK）经过人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因永生化转染建立的连续生长细胞系。与传统肿瘤来源的角质形成细胞（如 HaCaT）相比，N/TERT-2G 极大程度保留了正常角质形成细胞的分化潜能、表皮屏障功能以及对钙离子（$\text{Ca}^{2+}$）诱导的分化响应性，是皮肤毒理学、表皮重建（3D Organotypic Skin Models）、银屑病及特应性皮炎研究的标准模型。

二、 细胞生物学特征 / Biological Characteristics

• 组织来源 / Tissue Origin：人皮肤表皮（Human Epidermis）

• 细胞类型 / Cell Type：表皮角质形成细胞（Epidermal Keratinocytes）

• 生长特性 / Growth Properties：贴壁生长（Adherent），呈现典型的铺路石状（Pavement-like / Epithelial）上皮排列

• 分化潜能 / Differentiation Capability：高浓度钙离子（$\ge 1.2 \text{ mM Ca}^{2+}$）或气液界面（Air-Liquid Interface, ALI）培养下可诱导表达 Cytokeratin 1/10、Involucrin 及 Loricrin，重构具备功能性的 Stratum Corneum（角质层）

• 应用领域 / Applications：3D 表皮模型重建、皮肤屏障与修复机制、皮肤刺激性/毒理学测试（OECD 规范）、皮肤免疫学与微生物组相互作用

三、 培养条件与传代指南 / Culture & Handling Protocols

1. 完全培养基配方 / Complete Medium Formulation

• 无血清无喂养层体系 / Serum-Free Feeder-Free Culture：

  • 基础培养基 / Basal Medium：Keratinocyte SFM (KSFM) 或 RMPI-1640 / DMEM-F12 混合专用培养基（包含 low $\text{Ca}^{2+}$, $\sim 0.09 \text{ mM}$）

  • 生长因子 / Additives：人重组表皮生长因子（rEGF 0.2 ng/mL）、牛垂体提取物（BPE 25 µg/mL）

• 传代防钙诱导注意：低钙环境维持其干细胞/前体状态，防止细胞过早融合自发分化。

2. 培养条件与传代规范 / Incubation & Subculture

• 培养环境 / Conditions：37°C，5% $\text{CO}_2$，饱和湿度。

• 维持密度 / Density：接种密度不宜低于 $5 \times 10^3 \text{ cells/cm}^2$，汇合度达到 70% – 80% 时必须传代。

• 传代操作 / Subculture：

  1. 吸除旧培养基，以无钙镁 PBS 洗涤 1 次。

  2. 加入 0.05% Trypsin-EDTA（或 TrypLE），37°C 孵育 3–5 分钟，镜检观察细胞变圆解离。

  3. 加入含胰酶抑制剂（Soybean Trypsin Inhibitor）的培养基终止消化，轻柔吹打。

  4. 1000 rpm 离心 5 分钟，重悬接种于新培养瓶中，传代比例建议 1:3 至 1:6。

  

四、 技术指标简表 / Technical Data Summary

BioVector® N/TERT-2G Human Immortalized Keratinocyte Datasheet (English)

1. Background & Context

The N/TERT-2G cell line represents an hTERT-immortalized human epidermal keratinocyte line. Unlike transformed or carcinoma-derived cell lines (such as HaCaT or A431), N/TERT-2G closely mimics primary human epidermal keratinocytes (NHEK) in genomic stability, proliferation kinetics, and physiological differentiation. It serves as a benchmark model for 3D reconstructed human epidermis (RHE), barrier function testing, and cutaneous pharmacology.

2. Biological Characteristics

• Organism & Tissue:Homo sapiens (Human), Epidermis.

• Growth Properties: Adherent; tight epithelial/pavement-like colonies.

• Differentiation Response: Undergoes canonical terminal differentiation upon calcium switch ($\ge 1.2 \text{ mM Ca}^{2+}$) or air-liquid interface (ALI) culture, expressing key differentiation markers including Involucrin, Filaggrin, and Loricrin.

3. Culture Protocols

• Basal Medium: Low-calcium keratinocyte medium (e.g., Keratinocyte-SFM supplemented with EGF and Bovine Pituitary Extract).

• Culture Density: Subculture before confluence reaches 80% to maintain proliferative potential and prevent early differentiation.

• Subculture Method: Dissociate using 0.05% Trypsin-EDTA or TrypLE, neutralize with trypsin inhibitor or complete serum-containing medium, and re-plate at $1:3 - 1:6$ ratios.

4. Technical Data Summary

BioVector NTCC质粒载体菌株细胞蛋白抗体基因保藏中心

电话:400-800-2947

工作QQ/微信同号:1843439339

E-mail:BioVector@163.com

网址http://www.biovector.net