BioVector® PLC/PRF/5 人肝癌细胞株 / BioVector® Human PLC/PRF/5 Hepatoma Cell Line (Alexander Cell Line)

1 细胞株基本信息与生理表型 / Cell Line Identification and Physiological Profiling

• 细胞株名称 (Cell Line Name)：BioVector® PLC/PRF/5 人肝癌细胞株。

• 常用别名与通用代号 (Synonyms & Line Designations)：

  • PLC/PRF/5

  • Alexander Cell Line（亚历山大细胞系）

  • BioVector® PLC/PRF/5 Human Hepatoma Baseline

• 种属与组织来源 (Species & Tissue Origin)：人（Homo sapiens），来源于一位男性原发性肝细胞癌（HCC）患者的肝肿瘤组织，基因组天然稳定整合有乙型肝炎病毒（HBV）DNA 片段。

• 形态与生长表型 (Morphology & Growth Profile)：呈现典型的多角形上皮样形态（Epithelial-like）。完全贴壁生长（Adherent），呈单层紧密集聚生长，胞质丰富，倍增时间约为 30–42 小时。

• 生物安全等级 (Biosafety Level)：2 级安全控制（BSL-2）（因染色体稳定整合有 HBV DNA 基因组片段并可持续分泌 HBsAg，须在 BSL-2 生物安全实验室环境及超净台/安全柜中操作）。

2 HBV 基因组整合与 HBsAg 分泌及药效评价价值 / HBV Integration, HBsAg Secretion, and Oncological Research Value

BioVector® PLC/PRF/5 细胞株是研究 HBV 诱发肝癌机制及乙肝表面抗原（HBsAg）表达调控的标准体外模型：

The BioVector® PLC/PRF/5 cell line contains integrated Hepatitis B Virus (HBV) DNA fragments and serves as an established human hepatoma model for studying HBsAg biosynthesis, viral-host genomic interactions, and anti-HBV therapeutic screening:

HBsAg 自主表达与抗 HBV 药物筛选 (HBsAg Expression & Anti-HBV Drug Discovery)

• 天然可持续分泌 HBsAg (Continuous HBsAg Secretion)：细胞染色体整合有多个拷贝的 HBV DNA（主要编码 HBsAg 结构蛋白），可在不产生感染性完整病毒颗粒（Virions）的前提下，稳定高浓度向培养上清中分泌 HBsAg（乙肝表面抗原 22 nm 颗粒）。

• 抗 HBV 靶向药物筛选 (HBsAg Expression Inhibitor Screening)：广泛用于干扰素、RNAi 基因沉默、HBsAg 分泌抑制剂及乙肝表面抗原诊断试剂（ELISA/ECLIA）校准品原料的研发与评价。(Serves as a reliable non-infectious cellular system for quantifying HBsAg secretion inhibition, HBV promoter regulation, and liver cancer biomarker assays.)

3 细胞完全培养基配方与维持培养规范 / Routine Culture and Maintenance Formulations

核心 BSL-2 防护与消化控制规程 / BSL-2 Safety & Moderate Passaging Notice

PLC/PRF/5 含有 HBV 整合元件，必须严格按照 BSL-2 规范进行废弃物高压灭菌与个人防护；细胞贴壁较牢固且易形成集聚团块，建议使用 0.25% Trypsin-EDTA 在 $37^\circ\text{C}$ 处理 3–5 分钟，轻轻吹打至单细胞悬液，避免长期生长过密引发接触抑制。(Cultivate under BSL-2 containment; perform gentle trypsinization to disperse cell clusters without compromising membrane viability.)

基础与完全培养基组分配方 / Complete Growth Media Formulations

• 1. 高品质完全培养基 (BioVector® Complete Medium for PLC/PRF/5)：

  • BioVector® MEM / High-Glucose DMEM Base（MEM 或高糖 DMEM 基础培养基）：88%

  • BioVector® Premium Fetal Bovine Serum（特级胎牛血清，经热灭活）：10%

  • BioVector® Non-Essential Amino Acids (NEAA, 100X)：1%

  • BioVector® Penicillin-Streptomycin（双抗）：1%

• 2. 贴壁消化与洗涤液 (Harvesting Reagents)：

  • BioVector® 0.25% Trypsin-0.02% EDTA Solution

  • BioVector® Sterile PBS Wash Buffer

标准物理培养环境 (Incubation Parameters)

• 气体与温度控制 (Incubation Setup)：透气培养瓶，运行工作温度精密锁定在 37 摄氏度，5% 二氧化碳 ($\text{CO}_2$)。

4 细胞复苏、消化传代与超低温冻存工作流 / Thawing, Subculturing, and Preservation Workflows

A 阶段：细胞冻存管的复苏启动 / Phase A: Thawing & Primary Seeding

1. 从 $-196^\circ\text{C}$ 液氮罐中移出 BioVector® PLC/PRF/5 冻存管，迅速置于 $37^\circ\text{C}$ 水浴中摇晃融化（2 分钟内）。

2. 将细胞悬液转移至含 5 mL 预热 BioVector® Complete Medium 的 15 mL 离心管中。

3. $1000\text{ rpm}$（约 $180\times g$）离心 4 分钟，弃去含 DMSO 的冻存上清。

4. 加入 5 mL 完全培养基吹打重悬，接种至 T25 培养瓶中，置于 $37^\circ\text{C}$、$5\%\ \text{CO}_2$ 培养箱过夜。

B 阶段：日常消化传代 / Phase B: Subculturing Protocol

1. 当细胞贴壁密度达到 $75\%\text{--}85\%$ 汇合度 时进行传代（通常 3–4 天传代一次）。

2. 吸弃旧培养基，用无菌 PBS 轻柔洗涤 1–2 次。

3. 加入 1 mL BioVector® 0.25% Trypsin-EDTA，$37^\circ\text{C}$ 消化 3–5 分钟，待细胞收缩脱落后加入 3 mL 完全培养基终止消化。

4. 吹打成单细胞悬液，按 1:3 至 1:5 的比例 分瓶继续培养。

C 阶段：超低温冻存建立 / Phase C: Cryopreservation

1. 收集对数生长盛期（活率 $\ge 95\%$）的 PLC/PRF/5 细胞，离心沉淀。

2. 使用 BioVector® High-Recovery Cell Cryopreservation Medium（高复苏细胞冻存液，含 10% DMSO 及高浓度血清） 重悬，控制密度至 $2\times 10^6\text{--}5\times 10^6\text{ cells/mL}$。

3. 放入程序降温盒置于 $-80^\circ\text{C}$ 过夜，随后转入 $-196^\circ\text{C}$ 液氮罐 长期保存。

5 STR 鉴定、HBsAg 分泌表达量（$\ge 1.0\ \mu\text{g/mL/48h}$）与无污染一票否决制质控红线 / Downstream Quality Control Metrics

人类 STR 基因同源性与细胞鉴定 (Species & Lineage Authentication)

必须定期使用 BioVector® Human STR Profiling Kit 验证 21 个 STR 位点，确保与 ATCC CRL-8024 / JCRB PLC/PRF/5 宿主基因指纹 100% 匹配，完全排除外源细胞交叉污染。

HBsAg 分泌表达量（定量通量 $\ge 1.0\ \mu\text{g/mL/48h}$）一票否决制质控红线 (Quality and HBsAg Gatekeeper)

为了阻断由于长期传代导致 HBV 整合序列沉默、HBsAg 分泌衰减或隐形支原体污染导致抗 HBV 药效评估失效的灾难性后果，质控部门必须执行硬性的“HBsAg 分泌表达量”一票否决制质控：

1. 宿主纯度与无支原体红线：STR 比对结果必须为 100% PLC/PRF/5 基因型，且 支原体（Mycoplasma）PCR 检测严格为 100% 阴性。

2. HBsAg 分泌表达量质控红线（核心考核）：取铺满度 80% 的细胞培养上清，采用 ELISA 或微孔板电化学发光法（ECLIA）定量测定，培养 48 小时积累的上清 HBsAg 表达量必须严格大于或等于 $1.0\ \mu\text{g/mL/48h}$（即定量通量 $\ge 1.0\ \mu\text{g/mL/48h}$，显性 ELISA 阳性）。

3. 一票否决处理规范：一旦质控检测发现上清中 HBsAg 分泌量 跌破 $1.0\ \mu\text{g/mL/48h}$ 门槛线 或检出支原体污染，该生产或实验批次细胞执行一票否决红线制，彻底高压灭菌销毁（121 摄氏度，20 分钟）。绝对禁止将发光/抗原表达衰减的细胞投入评价。必须立刻重新复苏原始低代次的 BioVector® PLC/PRF/5 种子冻存管。(Enforce a rigid functional gatekeeper: PLC/PRF/5 cell stocks must strictly verify human STR identity, zero mycoplasma contamination, paired with a secreted HBsAg expression flux $\ge 1.0\ \mu\text{g/mL/48h}$. Any secretion failure or microbial contamination triggers an immediate system veto to destroy running cultures instantly.)