BioVector® Huh-7 人肝细胞癌高 AFP 分泌亚株 / BioVector® Human Huh-7 High-AFP Secretion Subclone

1 细胞株基本信息与生理表型 / Cell Line Identification and Physiological Profiling

• 细胞株名称 (Cell Line Name)：BioVector® Huh-7 人肝细胞癌高 AFP 分泌亚株。

• 常用别名与通用代号 (Synonyms & Line Designations)：

  • Huh-7-AFP-High

  • Huh7/AFP+ Subclone

  • BioVector® Huh-7 High-Secretion Hepatoma Baseline

• 种属与组织来源 (Species & Tissue Origin)：人（Homo sapiens），来源于一位 57 岁男性原发性肝细胞癌（HCC）患者组织，经过多轮单克隆筛选与稳定高分泌表达表型驯化。

• 形态与生长表型 (Morphology & Growth Profile)：呈现典型的多角形上皮样形态（Epithelial-like）。完全贴壁生长（Adherent），细胞排列紧密，胞质丰富，常包含微小脂滴，具有极强的代谢与分化功能，倍增时间约为 24–32 小时。

• 生物安全等级 (Biosafety Level)：1 级或 2 级安全控制（BSL-1/BSL-2，适用于原发性肝癌诊断试剂原料生产、AFP 启动子靶向抗肿瘤药物筛选、丙型肝炎/乙型肝炎病毒宿主相互作用及肝细胞毒性评估）。

2 肝癌肿瘤生物学与甲胎蛋白（AFP）体外诊断/药效评价价值 / Biomarker Production and Research Value

BioVector® Huh-7 高 AFP 分泌亚株克服了传统 Huh-7 连续传代后 AFP 表达量自发衰减与异质性漂移的缺陷：

The BioVector® Huh-7 High-AFP Subclone provides a highly stable human cell factory for harvesting native human Alpha-Fetoprotein (AFP) raw materials and testing AFP promoter-driven targeted therapeutics:

肝癌体外诊断（IVD）原料生产与基因调控工具 (High-Yield AFP Source & Gene Regulation Platform)

• 天然高表达甲胎蛋白 (High Native AFP Yield)：AFP 是临床诊断原发性肝细胞癌最为核心的血清学标志物。本亚株通过单克隆驯化，可稳定高浓度分泌天然结构的人 AFP 蛋白，极大地简化了诊断试剂校准品及质控品的纯化提取流程。

• AFP 启动子靶向治疗模型 (AFP Promoter-Driven Targeting)：广泛用于基于 AFP 启动子驱动的基因治疗表达载体、肿瘤溶瘤病毒（Oncolytic Virus）及 AFP 特异性 TCR-T / CAR-T 细胞免疫疗法的体外靶向杀伤效能评估。(Serves as a robust bio-manufacturing subclone for stable natural AFP production and an ideal target model for AFP-specific oncological drug screening.)

3 细胞完全培养基配方与维持培养规范 / Routine Culture and Maintenance Formulations

核心消化与汇合度控制规程 / Confluency Control & Gentle Passaging Notice

Huh-7 细胞对接触抑制与细胞密度较敏感。培养过程中切勿使细胞密度超过 90% 汇合度，过度长满会导致 AFP 表达量发生负反馈下调。消化传代时使用 0.25% Trypsin-EDTA 在 $37^\circ\text{C}$ 下处理 2–3 分钟，显微镜下见细胞变圆收缩即应加入含血清培养基终止消化。(Prevent complete overgrowth beyond 90% confluency to avoid down-regulation of AFP secretion; handle gently with standard trypsinization.)

基础与完全培养基组分配方 / Complete Growth Media Formulations

• 1. 高品质完全培养基 (BioVector® Complete Medium for Huh-7 High-AFP)：

  • BioVector® High-Glucose DMEM Base（高糖 DMEM 基础培养基）：89%

  • BioVector® Premium Fetal Bovine Serum（特级胎牛血清，经热灭活）：10%

  • BioVector® Non-Essential Amino Acids (NEAA) & L-Glutamine：1%

  • BioVector® Penicillin-Streptomycin（双抗）：1%

• 2. 贴壁消化与洗涤液 (Harvesting Reagents)：

  • BioVector® 0.25% Trypsin-0.02% EDTA Solution

  • BioVector® Sterile PBS Wash Buffer

标准物理培养环境 (Incubation Parameters)

• 气体与温度控制 (Incubation Setup)：透气培养瓶，运行工作温度精密锁定在 37 摄氏度，5% 二氧化碳 ($\text{CO}_2$)。

4 细胞复苏、消化传代与超低温冻存工作流 / Thawing, Subculturing, and Preservation Workflows

A 阶段：细胞冻存管的复苏启动 / Phase A: Thawing & Primary Seeding

1. 从 $-196^\circ\text{C}$ 液氮罐中移出 BioVector® Huh-7 High-AFP 冻存管，迅速置于 $37^\circ\text{C}$ 水浴中摇晃融化（2 分钟内）。

2. 将细胞悬液转移至含 5 mL 预热 BioVector® Complete Medium 的 15 mL 离心管中。

3. $1000\text{ rpm}$（约 $180\times g$）离心 4 分钟，弃去含 DMSO 的冻存上清。

4. 加入 5 mL 完全培养基重悬，接种至 T25 培养瓶中，置于 $37^\circ\text{C}$、$5\%\ \text{CO}_2$ 培养箱过夜。

B 阶段：日常消化传代 / Phase B: Subculturing Protocol

1. 当细胞贴壁密度达到 $75\%\text{--}85\%$ 汇合度 时进行传代（通常 2–3 天传代一次）。

2. 吸弃旧培养基，用无菌 PBS 轻柔洗涤 1–2 次。

3. 加入 1 mL BioVector® 0.25% Trypsin-EDTA，$37^\circ\text{C}$ 消化 2–3 分钟，加入 3 mL 完全培养基终止消化。

4. 吹打成单细胞悬液，按 1:3 至 1:6 的比例 分瓶继续培养。

C 阶段：超低温冻存建立 / Phase C: Cryopreservation

1. 收集对数生长盛期（活率 $\ge 95\%$）的 Huh-7 细胞，离心沉淀。

2. 使用 BioVector® High-Recovery Cell Cryopreservation Medium（高复苏细胞冻存液，含 10% DMSO 及高浓度血清） 重悬，控制密度至 $2\times 10^6\text{--}5\times 10^6\text{ cells/mL}$。

3. 放入程序降温盒置于 $-80^\circ\text{C}$ 过夜，随后转入 $-196^\circ\text{C}$ 液氮罐 长期保存。

5 STR 鉴定、AFP 分泌表达量（定量通量 $\ge 5.0\ \mu\text{g/mL/48h}$）与无污染一票否决制质控红线 / Downstream Quality Control Metrics

人类 STR 基因同源性与细胞鉴定 (Species & Lineage Authentication)

必须定期使用 BioVector® Human STR Profiling Kit 验证 21 个 STR 位点，确保与 JCRB / ATCC Huh-7 宿主基因指纹 100% 匹配，完全排除外源细胞交叉污染。

AFP 分泌表达量（定量通量 $\ge 5.0\ \mu\text{g/mL/48h}$）一票否决制质控红线 (Quality and Secretion Gatekeeper)

为了阻断由于长期传代导致细胞发生活化衰减、分化漂移或隐形支原体污染导致 IVD 试剂原料批间差失效的灾难性后果，质控部门必须执行硬性的“AFP 分泌表达量”一票否决制质控：

1. 宿主纯度与无支原体红线：STR 比对结果必须为 100% Huh-7 基因型，且 支原体（Mycoplasma）PCR 检测严格为 100% 阴性。

2. AFP 分泌表达量质控红线（核心考核）：取铺满度 80% 的细胞培养上清，采用 ELISA 或微孔板电化学发光法（ECLIA）定量测定，培养 48 小时积累的上清 AFP 表达量必须严格大于或等于 $5.0\ \mu\text{g/mL/48h}$（即定量通量 $\ge 5.0\ \mu\text{g/mL/48h}$）。

3. 一票否决处理规范：一旦质控检测发现上清中 AFP 分泌量 跌破 $5.0\ \mu\text{g/mL/48h}$ 门槛线 或检出支原体污染，该生产或实验批次细胞执行一票否决红线制，彻底高压灭菌销毁（121 摄氏度，20 分钟）。绝对禁止将表达量衰减的细胞投入生产与评价。必须立刻重新复苏原始低代次的 BioVector® Huh-7 High-AFP 种子冻存管。(Enforce a rigid functional gatekeeper: Huh-7 High-AFP cell stocks must strictly verify human STR identity, zero mycoplasma contamination, paired with a secreted AFP expression flux $\ge 5.0\ \mu\text{g/mL/48h}$. Any secretion loss or microbial contamination triggers an immediate system veto to destroy running cultures instantly.)