BioVector® ASZ001 小鼠基底细胞癌细胞株 / BioVector® ASZ001 Mouse Basal Cell Carcinoma Cell Line

1 细胞株基本信息与生理表型 / Cell Line Identification and Physiological Profiling

• 细胞株名称 (Cell Line Name)：BioVector® ASZ001 小鼠基底细胞癌细胞株。

• 常用别名与通用代号 (Synonyms & Line Designations)：

  • ASZ001

  • ASZ001.1

  • BioVector® ASZ001 Mouse BCC Line

• 种属与组织来源 (Species & Tissue Origin)：小鼠（Mus musculus），来源于电离辐射诱导的 Ptch1 杂合缺失（Ptch1$\pm$）小鼠基底细胞癌（Basal Cell Carcinoma, BCC）组织。

• 形态与生长表型 (Morphology & Growth Profile)：呈典型的上皮样形态（Epithelial-like），贴壁生长（Adherent）。细胞多角形，排列紧密，保留了基底样角质形成细胞的干细胞特征与未分化表型。

• 生物安全等级 (Biosafety Level)：1 级安全控制（BSL-1，适用于 Hedgehog 信号通路调控、皮肤肿瘤学、SMO 靶向抑制剂药效评价及耐药机制研究）。

2 Hedgehog 信号通路与基底细胞癌（BCC）药效评价价值 / Hedgehog Signaling and Oncological Research Value

BioVector® ASZ001 是目前国际公认的基底细胞癌（BCC）体外研究金标准细胞模型：The BioVector® ASZ001 cell line is a premier in vitro model for studying Hedgehog (Hh) pathway-driven basal cell carcinoma pathobiology and screening targeted therapeutics:

抑癌基因缺失与 Hh 通路持续激活 (Ptch1 Deficit & Constitutive Hh Pathway Activation)

• Ptch1 基因功能缺失 (Loss of Ptch1 Function)：由于 Ptch1 基因突变/缺失，对 Smoothened (SMO) 蛋白的抑制作作用被解除，导致下游转录因子 Gli1/Gli2 表达水平持续上调。

• 靶向药物筛选与耐药研究 (SMO Inhibitor Screening & Resistance Models)：广泛用于维莫德吉（Vismodegib）、索尼德吉（Sonidegib）等 SMO 抑制剂的体外药效评估，以及研究 SMO 继发性突变导致的肿瘤耐药机制。(Serves as an indispensable platform for evaluating novel Hedgehog signaling cascade antagonists and deciphering drug resistance in skin malignancies.)

3 培养基配方与低钙质培养规范 / Culture Formulations and Low-Calcium Maintenance

核心培养与分化控制规程 / Low-Calcium Medium & Gentle Passaging Notice

ASZ001 细胞必须在低钙离子浓度（$\le 0.05\text{ mM }\text{Ca}^{2+}$）的无血清或低血清培养体系中维持生长，高浓度 $\text{Ca}^{2+}$ 会迅速诱导细胞发生不可逆的终末角化分化并停止增殖。消化时建议使用 0.05% Trypsin-EDTA 或 Accutase 温和处理，避免过度消化破坏细胞膜表面受体。

基础与完全培养基组分配方 / Complete Growth Media Formulations

• 1. 高品质 ASZ001 完全培养基 (BioVector® Keratinocyte-SFM Complete Medium)：

  • BioVector® Medium 154CF / Keratinocyte-SFM（低钙无血清培养基，$\text{Ca}^{2+} < 0.05\text{ mM}$）：98%

  • BioVector® HKGS / Epidermal Growth Factor Supplement（人角质形成细胞生长补充剂）：1%

  • BioVector® Chelex-Treated FBS（脱钙处理胎牛血清）：1%（可选，部分实验室采用 154CF 无血清体系）

  • BioVector® Penicillin-Streptomycin（双抗）：1%

• 2. 贴壁消化与传代试剂 (Subculture Reagents)：

  • BioVector® 0.05% Trypsin-0.02% EDTA Solution 或 BioVector® Accutase Dissociation Reagent

标准物理培养环境 (Incubation Parameters)

• 气体与温度控制 (Incubation Setup)：透气培养瓶，运行工作温度精密锁定在 37 摄氏度，5% 二氧化碳 ($\text{CO}_2$)。

4 细胞复苏、消化传代与超低温冻存工作流 / Thawing, Subculturing, and Preservation

A 阶段：细胞冻存管的复苏启动 / Phase A: Thawing & Seeding

1. 将 BioVector® ASZ001 冻存管从 $-196^\circ\text{C}$ 液氮中移出，迅速置于 $37^\circ\text{C}$ 水浴中摇晃融化（1–2 分钟）。

2. 将细胞悬液吸入含 5 mL 预热低钙完全培养基的离心管中，$1000\text{ rpm}$（约 $200\times g$）离心 5 分钟。

3. 弃去上清液，加入 5 mL BioVector® Low-Ca2+ Complete Medium 重悬，接种至包被有明胶或 Type I 胶原的 T25 培养瓶中，$37^\circ\text{C}$、$5\%\ \text{CO}_2$ 培养。

B 阶段：日常消化传代 / Phase B: Subculturing Protocol

1. 当细胞贴壁密度达到 $75\%\text{--}85\%$ 汇合度 时进行传代（切勿过度长满，否则易诱导接触抑制与分化）。

2. 吸弃旧培养基，用无钙镁离子 PBS 缓冲液（DPBS without $\text{Ca}^{2+}/\text{Mg}^{2+}$）洗涤 2 次。

3. 加入 1 mL BioVector® 0.05% Trypsin-EDTA 或 Accutase，$37^\circ\text{C}$ 消化 2–3 分钟，加入含微量血清的培养基终止消化。

4. 轻轻吹打成单细胞悬液，按 1:3 至 1:4 的比例 分瓶传代（每周传代 2 次）。

C 阶段：超低温冻存建立 / Phase C: Cryopreservation

1. 收集处于对数生长盛期的未分化 ASZ001 细胞，离心沉淀。

2. 使用 BioVector® Protein-Free Serum-Free Cryopreservation Medium（低钙无血清无蛋白冻存液） 或含 10% DMSO 的完全培养基重悬，控制密度至 $1\times 10^6\text{ cells/mL}$。

3. 放入程序降温盒置于 $-80^\circ\text{C}$ 过夜，随后转入 $-196^\circ\text{C}$ 液氮罐 长期保存。

5 Hedgehog 通路特征分子表达（Gli1 阳性率 $\ge 95.0\%$）与无污染一票否决制质控红线 / Downstream Quality Control Metrics

物种同源性与 Hh 通路激活验证 (Species Authentication & Pathway Profiling)

定期采用 BioVector® Mouse STR Profile Kit 验证小鼠基因组特征，并通过 RT-qPCR / Western Blot 确认细胞高表达 Gli1、Gli2、Ptch2 等 Hh 通路下游靶基因，确保其基底细胞癌分子特征稳定。

Hh 活化阳性率与无支原体污染（Gli1 阳性率 $\ge 95.0\%$）一票否决制质控红线 (Pathway Integrity & Purity Gatekeeper)

为防止 ASZ001 在连续传代过程中发生活化丢失、自发分化或隐形支原体污染导致药效实验失效，质控流程执行硬性质控指标：

1. 物种同源红线：STR 鉴定及 PCR 扩增必须 100% 确认小鼠（Mus musculus）源性，无人源或大鼠交叉污染。

2. Hh 通路特征标志物质控红线（核心考核）：通过流式细胞术（FACS）或免疫荧光检测，ASZ001 细胞内 Gli1 蛋白/转录高表达阳性率必须严格大于或等于 $95.0\%$，且 无支原体（Mycoplasma）、细菌及真菌污染。

3. 一票否决处理规范：若检测显示 Gli1 阳性率 跌破 95.0% 门槛线 或检出支原体污染，该批次细胞执行一票否决红线制，彻底高压灭菌销毁，绝对禁止进入药效筛选流程，并立刻重新复苏原始 BioVector® ASZ001 种子冻存管。(Enforce a rigid functional gatekeeper: ASZ001 cell lots must strictly verify mouse species identity, zero mycoplasma contamination, paired with a Hedgehog pathway Gli1 positive activation rate $\ge 95.0\%$. Any signaling loss or contamination triggers an immediate system veto to destroy running cultures instantly.)