BioVector® HCA-1 小鼠肝细胞癌细胞株 / BioVector® Mouse Hepatocellular Carcinoma HCA-1 Cell Line

1 细胞株基本信息与生理表型 / Cell Line Identification and Physiological Profiling

• 细胞株名称 (Cell Line Name)：BioVector® HCA-1 小鼠肝细胞癌细胞株 (BioVector® Mouse Hepatocellular Carcinoma HCA-1 Cell Line)。

• 常用别名与通用代号 (Synonyms & Alternative Line Designations)：

  • HCA-1 Mouse Hepatoma

  • HCA1 Hepatic Carcinoma Strain

  • BioVector® Murine HCA-1 Hepatocellular Line

  • HCA-1 Syngeneic Model Baseline

• 种属与组织来源 (Species & Tissue Origin)：小鼠（Mus musculus，C3H/He 背景），来源于自发或化学诱导（如二乙基亚硝胺 DEN）产生的小鼠原发性肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma, HCC）组织，属于同源同基因（Syngeneic）免疫肿瘤学经典模型细胞系。

• 基因型与表型指纹 (Genotype & Phenotypic Fingerprint)：具有完整的 C3H 小鼠 MHC Class I（H-2Kk/H-2Dk）表型特征；保持原发性肝癌的甲胎蛋白（AFP）表达与脂质/糖原代谢相关通路特征，对肿瘤免疫微环境（TME）调节分子具有高度响应性。

• 形态与生长表型 (Morphology & Growth Profile)：上皮样细胞（Epithelial-like），贴壁生长（Adherent）。呈多角形或不规则岛状紧密聚集，细胞核大且核仁明显，倍增时间约 20-24 小时；在 C3H/He 同基因小鼠体内具有极高的皮下与肝脏原位成瘤（Tumorigenicity）能力。

• 生物安全等级 (Biosafety Level)：1 级安全控制（BSL-1，体外科研、肝癌免疫治疗与同基因小鼠移植瘤模型构建专用）。

2 分子肿瘤学特征与同基因小鼠肿瘤免疫/肝癌靶向药评估模型价值 / Molecular Dynamics and Syngeneic Tumor Immunity Models

BioVector® HCA-1 细胞株是用于评估肝细胞癌（HCC）免疫检查点抑制剂（如 Anti-PD-1 / Anti-PD-L1 / Anti-CTLA-4）、溶瘤病毒疗法、靶向酪氨酸激酶抑制剂（TKI）以及免疫微环境重塑中公认的“小鼠同基因肝癌标准模型基准”：The BioVector® HCA-1 cell line serves as a foundational syngeneic murine hepatocellular carcinoma model for evaluating liver cancer immunotherapies, tumor microenvironment interactions, and targeted therapeutic compounds in immunocompetent C3H mice:

核心 C3H 同基因免疫成瘤与肝癌表型 (C3H Syngeneic Immunocompetent Model & Hepatic Biomarkers)

作为在免疫健全小鼠体内拥有高度可重复成瘤性的原核/真核肿瘤底盘，该细胞在分子与动物模型层面展现出确凿的表型指纹：

• 免疫健全小鼠高成瘤性 (Syngeneic Immunocompetent Transplantability)：可直接接种于 C3H/He 免疫健全小鼠皮下或肝脏原位，无需使用免疫缺陷小鼠（如 Nude 或 NSG），能精准再现细胞毒性 T 淋巴细胞（CTL）、髓系来源抑制细胞（MDSC）及肿瘤相关巨噬细胞（TAM）与肝癌细胞的动态互作。

• 经典肝癌生物标记物表达 (Hepatic Lineage Profiling)：稳态表达甲胎蛋白（AFP）及肝细胞特异性表面抗原，保留原发性肝癌的血管生成因子（如 VEGF）分泌特性。(Offers an immunocompetent C3H-derived liver cancer system with robust syngeneic tumor graft efficiency for evaluating systemic targeted therapies and immune checkpoint blockade.)

3 细胞完全培养基配方与无血清传代栽培规范 / Routine Culture and Maintenance Formulations

核心红线规程 / Seed Density & Gentle Detachment NoticeHCA-1 小鼠肝癌细胞生长旺盛且贴壁十分紧密，极易在过饱和状态下发生贴壁层成片脱落与自溶。日常传代必须在细胞融合度达到 75%-85% 时及时进行，绝对禁止让细胞生长过密致使培养液严重酸化（变黄）。消化时必须使用预热的 BioVector® Trypsin-EDTA Digest Solution，并在显微镜下严格把控消化时间（1-3 分钟），终止消化时须温和吹打，避免产生大量气泡导致细胞机械损伤。(Cultivate strictly at high-vitality densities using specialized BioVector® DMEM/RPMI media; avoid culture overgrowth to prevent media acidification and mass detachment.)

基础与完全培养基组分配方 / Complete Growth Media Formulations

• 1. 高品质完全培养基 (BioVector® Complete DMEM Medium for HCA-1)：

  • BioVector® High-Glucose DMEM Base（高糖 DMEM 基础培养基）：89%

  • BioVector® Premium Fetal Bovine Serum（特级胎牛血清，经热灭活）：10%

  • BioVector® Certified Penicillin-Streptomycin（优质双抗补剂）：1%

• 2. 辅助细胞消化与洗涤液 (Cell Harvest Reagents)：

  • BioVector® Standard Trypsin-EDTA Digest Solution（标准胰酶消化液，0.25% Trypsin + 0.02% EDTA）

  • BioVector® Sterile Phosphate Buffered Saline（无菌 PBS 洗涤液）

标准物理培养环境 (Incubation Parameters)

• 气体与温度控制 (Incubation Setup)：标准恒温加湿培养箱，运行工作温度精密锁定在 37 摄氏度，5% 二氧化碳 (${\text{CO}}_2$)。

4 细胞冻存管复苏、传代培养与超低温冻存工作流 / Thawing, Passage, and Cryopreservation Workflows

A 阶段：细胞冻存管的快速复苏启动 / Phase A: Thawing & Primary Seeding

1. 从零下 196 摄氏度液氮罐中移出 BioVector® HCA-1 细胞冻存管，立刻放入 37 摄氏度水浴 中快速摇晃融化（2 分钟内）。

2. 在无菌超净台内，将融化的细胞悬液转移至含 5 mL 预热 BioVector® Complete DMEM Medium 的 15 mL 离心管中。

3. 1,000 rpm（约 $200\times g$）离心 5 分钟，吸弃含 DMSO 的冻存上清。

4. 加入 5 mL 新鲜完全培养基重悬细胞，接种至 T25 培养瓶中，放入 37 摄氏度、5% CO2 孵箱中培养过夜。

B 阶段：日常传代与消化操作 / Phase B: Subculturing Protocol

1. 当细胞融合度达到 75%-85% 时进行传代。

2. 吸弃旧培养基，用 BioVector® PBS 洗涤液 润洗细胞层 1-2 次。

3. 加入 1 mL BioVector® Standard Trypsin-EDTA，置于 37 摄氏度孵箱温育 2-3 分钟，显微镜下观察至细胞变圆并脱落。

4. 立即加入 3 mL 预热的完全培养基终止消化，轻柔吹打制成单细胞悬液。

5. 按 1:3 至 1:6 的比例（密度不低于 $3\times 10^4{\text{cells/cm}}^2$）转接至新的培养瓶中，补足完全培养基继续培养。

C 阶段：高存活率超低温冻存建立 / Phase C: Cryopreservation

1. 收集处于对数生长盛期（融合度约 80%）的 HCA-1 细胞。

2. 使用 BioVector® High-Recovery Cell Cryopreservation Medium（高复苏无血清细胞冻存液） 重悬细胞，调整细胞密度至 $2\times 10^6\text{–}5\times 10^6\text{cells/mL}$。

3. 分装至无菌冻存管中，使用程序降温盒置于零下 80 摄氏度冰箱冷冻过夜，随后转入 液氮罐（零下 196 摄氏度） 长期保存。

5 支原体/小鼠 STR 鉴定与 C3H 小鼠成瘤率（100%）及 AFP 表达一票否决制质控红线 / Downstream Quality Control Metrics

支原体与小鼠 STR 基因同源性常规筛查 (Contamination & Lineage Identity Surveillance)

HCA-1 细胞易因交叉污染导致杂株混入或发生种属漂移。必须定期使用 BioVector® Mycoplasma PCR Detection Kit 筛查支原体；同时，定期使用 BioVector® Mouse STR Profiling Kit 验证小鼠 STR 位点（必须纯合匹配小鼠 C3H 基因背景，无人源或其他物种交叉污染）。

小鼠 STR 鉴定与 C3H 小鼠皮下成瘤率（100%）一票否决制双质控红线 (In Vivo Tumorigenic Gatekeeper)

为了阻断由于长期连续体外传代导致细胞发生基因组退化、成瘤能力丢失、或免疫原性漂移致使同基因动物实验彻底失效的灾难性后果，质控部门或研究人员必须在细胞建库与小鼠接种前，执行硬性的“种属基因-体内成瘤”双重一票否决制质控：

1. 小鼠 18-STR 位点与纯合背景质控红线：细胞必须通过小鼠 STR 交叉污染鉴定，确定为 100% 纯合小鼠 Mus musculus 来源，无任何人源（如 HeLa、293）或大鼠细胞污染。

2. C3H 小鼠同基因皮下成瘤率质控红线（核心考核）：取处于对数生长期的 HCA-1 细胞（$1\times 10^6\text{cells/只}$），接种于 5 只 6-8 周龄 C3H/He 同基因健全小鼠皮下。在接种后 14-21 天内，所有 5 只小鼠必须 100% 形成可见的实体皮下肿瘤（Tumor Take Rate $=100\%$），且 AFP 阳性表达率维持正常。

3. 一票否决处理规范：一旦质控检测发现 STR 杂菌/交叉污染，或 C3H/He 小鼠体内成瘤率跌破 100% 门槛线（或检测出支原体阳性），该生产或实验批次细胞执行一票否决红线制，全盘作废彻底高压灭菌销毁（121 摄氏度，20 分钟）。绝对禁止将成瘤失能或发生基因漂移的细胞投入体外药效评估或体内动物建模。必须立刻重新复苏原始极低代次的 BioVector® HCA-1 种子细胞管，重新开启扩增与质控循环。(Enforce a rigid, non-negotiable functional gatekeeper: HCA-1 cell stocks must strictly verify 100% mouse species purity via STR profiling paired with a 100% syngeneic tumor take rate in immunocompetent C3H/He mice. Any loss in in vivo tumorigenicity or mycoplasma contamination triggers an immediate system veto to destroy running cultures instantly.)