BioVector® BT12 人非典型畸胎瘤样/横纹肌样瘤细胞株 / BioVector® BT12 Human Atypical Teratoid/Rhabdoid Tumor Cell Line

1 细胞基本信息与遗传学表型 / Cell Identification and Cytogenetic Profiling

• 细胞名称 (Cell Name)：BioVector® BT12 人非典型畸胎瘤样/横纹肌样瘤细胞 (BioVector® BT12 Human Atypical Teratoid/Rhabdoid Tumor Cell Line)

• 组织来源 (Tissue Origin)：人类中枢神经系统（脑部），非典型畸胎瘤样/横纹肌样瘤（AT/RT - Atypical Teratoid/Rhabdoid Tumor）。来源于一名儿童小儿脑肿瘤临床活检样本建立的永生化细胞系。

• 生长特性 (Growth Properties)：半贴壁半悬浮生长 (Semi-adherent / Suspended Aggregates)。该细胞在常规基质上呈现部分细胞松散贴壁，部分细胞自发脱落并聚集形成多细胞球状、葡萄串状悬浮克隆。

• 细胞形态 (Cell Morphology)：混合细胞形态。贴壁部分多呈不规则上皮样、小多角形或短纺锤状，胞质偏少且核仁清晰大而醒目；悬浮部分表现为致密的细胞球（Neuro-sphere-like aggregates）。(Presents a dual-growth topology. Adherent layers exhibit small, polygonal, epithelial-like single-cell tracks with high nuclear-to-cytoplasmic ratios, while non-adherent tracks spontaneously condense into high-density floatable clusters.)

• 安全等级 (Biosafety Level)：1 级安全控制（BSL-1，仅限体外科研使用）。

2 分子细胞生物学特征与恶性肿瘤建模价值 / Molecular Dynamics and SMARCB1 Deficient Tumor Models

BioVector® BT12 细胞株是全球神经肿瘤学、儿童肿瘤筛选及表观遗传重塑（Epigenetic reprogramming）研究中，用来模拟恶性中枢神经系统横纹肌样瘤（AT/RT）的国际标准化黄金体外模型：The BioVector® BT12 cell platform exhibits localized disruption of chromatin remodeling architectures, serving as a high-fidelity pediatric neuro-oncology validation gate for drug screening and targeted epigenetic therapeutics:

SMARCB1 / INI1 抑癌基因纯合性缺失红线 (Homozygous Deficiency of SMARCB1/INI1)

该恶性突变株最核心且具一票否决制的分子病理特征是 22号染色体（22q11.2）上的 SMARCB1（又称 INI1, SNF5, BAF47）抑癌基因发生双等位基因纯合性失活突变或大片段缺失：

• BAF复合物解体 (SWI/SNF Disruption)：由于 SMARCB1 蛋白的绝对缺乏，导致细胞内的 SWI/SNF（BAF）染色质重塑复合物核心骨架彻底解体。

• 表观遗传失控 (Epigenetic Dysregulation)：失去了对基因组染色质开放性的正常约束，引发下游增强子高甲基化及原癌基因（如 Cyclin D1 强力受抑，EZH2 代偿性极度亢进）的转录网络失控，直接锁死了细胞的多向未分化恶性增殖状态。(Characterized by homozygous mutation or deletion of the SMARCB1/INI1 locus, resulting in the absolute absence of functional INI1 expression. This structural deficit dismantles the SWI/SNF chromatin remodeling machinery, leading to hyper-activation of EZH2 methyltransferase cascades.)

3 细胞完全培养基配方与维持栽培规范 / Routine Culturing and Proliferation Specifications

核心红线规程 / Semi-Adherent Spheroid Preservation WarningBT12 细胞具有独特的半贴壁半悬浮二元生长特性。悬浮在培养基中的多细胞球和贴壁的单层细胞具有同等重要、甚至更高的恶性干性与克隆存活率。日常换液或传代时，严禁直接吸走并扔掉旧培养基的上清液，否则会导致悬浮的活细胞克隆被大量成批流失，导致瓶内细胞最终失去增殖活力而退化死绝。必须每次将整瓶的培养基连同悬浮细胞全部收集至无菌离心管中离心沉淀，方可进行常规换液或胰酶消化传代。(Because the floating cell aggregates retain identical viability and potential compared to the adherent monolayer, never aspirate and discard the exhausted culture medium directly. You must harvest the entire volume of media containing suspended clusters into sterile tubes for centrifugal sedimentation during routine feeding or passage phases.)

基础与完全培养基组分配方 / Complete Feeding Matrix Formulation

• 基础培养基 (Base Medium)：BioVector® Advanced DMEM/F12 复合营养液体培养基（含 L-谷氨酰胺与 HEPES 缓冲系统）。高级基础培养基能为该类小儿恶性干性肿瘤提供更稳定的微量元素本底。

• 完全培养基配方 (Complete Culture Media)：

  • BioVector® Advanced DMEM/F12 Base Medium：89%

  • BioVector® Certified Fetal Bovine Serum（优质灭活胎牛血清 / FBS）：10%（或可根据肿瘤干细胞培养需求，切换为 1% BioVector® B27 Supplement + 20 ng/mL BioVector® recombinant bFGF/EGF 的无血清神经球配方）

  • BioVector® Glutamax (高级谷氨酰胺稳定补剂 / 100X)：1%

  • （可选添加 / Optional）BioVector® Penicillin-Streptomycin（双抗补剂）：1%

特殊包被提示（可选） / Optional Coating Protocol

若部分实验需要将 BT12 细胞强行诱导为完全扁平贴壁以方便高内涵成像（High-content imaging），可在接种前使用 BioVector® Extracellular Matrix Matrigel（优质减生长因子基质胶） 或聚赖氨酸（Poly-D-Lysine）对培养皿表面进行预先包被。

标准物理培养环境 (Incubation Parameters)

• 气体与温度控制 (Atmospheric Setup)：标准恒温加湿孵箱，设定运行温度为 37 摄氏度，连续输入 5% 二氧化碳 (CO2)，湿度控制在 95% 以上。

4 细胞冻存管复苏、连续传代与冷冻保存工作流 / Thawing, Passage, and Cryopreservation Workflows

A 阶段：细胞库冻存管的复苏启动 / Phase A: Cryovial Thawing

1. 从液氮罐气相层中小心移出 BioVector® BT12 细胞冻存管，立刻完全浸没在 37 摄氏度恒温水浴锅中高频快速晃动，在 1 到 2 分钟内彻底融化。

2. 在无菌超净台内，将融化的细胞悬液缓慢注入含有 5 mL 预热的 BioVector® 完全培养基的 15 mL 无菌离心管中。

3. 以 1000 乘以 g 离心 4 分钟，彻底倒掉含有高浓度 DMSO 毒性的旧上清液。

4. 加入 5 mL 新鲜的完全培养基轻柔重悬细胞沉淀，接种至一个 T25 细胞培养瓶中移入孵箱。

5. 由于复苏初期细胞释放的促生长因子较为集中，复苏后前 48 小时尽量避免大幅晃动培养瓶，让贴壁部分稳固贴附。

B 阶段：半贴壁半悬浮细胞传代操作 / Phase B: Subculturing Method

1. 当瓶内贴壁细胞覆盖达到 80% 汇合度，且培养基中长满清晰可见的密集悬浮多细胞颗粒球时，启动传代。

2. 关键收集：将瓶内的全部旧培养基（连同所有悬浮细胞球）吸出，转移入一根 15 mL 无菌离心管中。

3. 向留在原培养瓶中的贴壁细胞层中加入 3-5 mL 无菌的 BioVector® PBS（不含钙镁平衡盐洗涤液） 轻柔润洗，再次吸出润洗液一并并入上述 15 mL 离心管中。

4. 向原培养瓶中加入 1.0 mL BioVector® Trypsin-EDTA（0.25% 胰蛋白酶消化液），置于 37 摄氏度孵箱中消化 2 分钟。

5. 与此同时，将那根 15 mL 离心管以 1000 乘以 g 离心 4 分钟。吸除上清，保留管底的悬浮细胞球沉淀。

6. 原培养瓶消化完毕后，镜下见贴壁细胞变圆，立即加入 3 mL 完全培养基终止消化。用血清枪轻柔吹打瓶壁，将解离下来的细胞悬液全部吸出，直接注入盛有刚才悬浮细胞沉淀的 15 mL 离心管中。(Harvest the floating profiles via centrifugation, and concurrently trypsinize the adherent monolayer back into single-cell forms. Pool both sets into one tube for homogeneous blending.)

7. 使用移液枪连续轻柔吹打该混合液 8 到 10 次，依靠机械剪切力将致密的细胞球彻底打散成单个游离细胞悬液（吹打严禁过度用力，避免剪切力损伤）。

8. 建议的传代比例为 1比2 到 1比3，分配接种到新的无菌培养瓶中，补充足量新鲜完全培养基。

C 阶段：高品质细胞冻存株建立 / Phase C: Safe Cryopreservation

1. 遵循上述传代工作流，将贴壁与悬浮细胞完整合并收集，打散成单细胞悬液，计数并离心沉淀。

2. 配制高级细胞冻存基质液，推荐组分为：BioVector® Advanced DMEM/F12（55%）+ BioVector® Certified FBS（35%）+ BioVector® Cryo-Grade DMSO（10%）；或直接选用无菌无血清型的 BioVector® Cellular Cryopreservation Medium 专用冻存液。

3. 调整细胞重悬密度至 3 乘以 10^6 到 5 乘以 10^6 个细胞/mL（该细胞偏小，冻存密度可适度偏高），分装入微量无菌冻存管。

4. 将冻存管放入 BioVector® Programmed Cooling Container（细胞程序降温盒） 中，立刻移入零下 80 摄氏度冰箱放置过夜。24 小时内必须将冻存管转移至液氮罐（零下 196 摄氏度）气相层中进行长期冷冻储存。(Utilize a BioVector® Programmed Cooling Container to preserve the unique multi-structural lineage profiles, transitioning the cells safely to liquid nitrogen vapor grids within 24 hours.)

5 INI1 表达缺失特征免疫印迹质控红线 / Verification of INI1 Expression Deficiency QC

支原体污染红线熔断消杀 (Mycoplasma Surveillance)

BT12 细胞一旦发生隐性支原体（Mycoplasma）污染，其 SWI/SNF 下游的非依赖性增殖基因网络会产生自发性紊乱，直接扭曲靶向药物的敏感性本底。必须每 4 周对细胞进行支原体 PCR 筛查。使用 BioVector® Mycoplasma PCR Detection Kit（支原体高灵敏 PCR 检测试剂盒） 扩增上清。一旦电泳检测在目标区间出现阳性污染条带，必须立即执行红线熔断消杀：彻底将该污染批次的细胞瓶高压灭菌（121 摄氏度），并对孵箱等全部空间使用 BioVector® Mycoplasma Disinfectant Spray（支原体专用高效消杀喷剂） 进行连续多轮饱和喷洒，随后重新复苏原始低代次无污染种子细胞。(Proactively test using the BioVector® Mycoplasma PCR Kit. Any validation of microbial contamination triggers an immediate red-line shutdown: autoclave the biological components at 121 degrees Celsius and erase the environment using BioVector® Mycoplasma Disinfectant Spray.)

SMARCB1 / INI1 蛋白绝对缺失转录印迹质控红线 (Protein-Level Depletion QC Metric)

为了确保对外交付或实验运行的 BioVector® BT12 细胞株没有发生“细胞系交叉污染”（如被生长极为顽强的 HeLa 或正常成纤维细胞污染顶替），质控部门或研究人员必须在每隔 8 到 10 代栽培时，执行经典的 Western Blot 或免疫细胞化学（ICC）核染色全检：

1. 提取培养中的 BT12 细胞总蛋白，同时引入一株常规的 INI1 阳性对照细胞（如 293T 或 MCF7 细胞）。

2. 使用针对 SMARCB1 / INI1 的特异性单克隆抗体 进行免疫印迹杂交检测。

3. 核心质控红线指标：合格交付的 BioVector® BT12 细胞株在 Western Blot 的对应分子量（约 47 kDa）位置必须表现为绝对的、完全的条带空白（即零表达，无任何显色条带），而阳性对照组（293T）必须长出粗壮的特异性强阳性条带。

4. 一票否决处理规范：如果在待测的 BT12 细胞孔位中哪怕隐约长出了微弱的 INI1 蛋白特异性阳性条带，则确证该批次细胞已发生致命的非 AT/RT 外源细胞交叉污染，或发生了罕见的表型畸变。该批次细胞执行一票否决制，必须立刻全盘倒掉、高压灭菌销杀全部当前运行瓶，并追溯彻底消杀所有可能受污染的培养环境，重新从低代次纯净种子冷冻管起步复苏。(Enforce a rigid, non-negotiable protein expression QC barrier: Western blot tracks mapping the SMARCB1/INI1 signal (at 47 kDa) inside harvested BioVector® BT12 proteins must return an absolute, pristine blank profile, whereas parallel control lines yield hyper-positive traces. If any responsive band resolves inside the BT12 loading slot, it triggers an absolute fail mechanism due to suspected cell-line cross-contamination; discard the entire production line instantly and re-initiate the cultivation workflow from early-passage master seed batches.)

BioVector NTCC质粒载体菌株细胞蛋白抗体基因保藏中心

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