BioVector® RPTEC 人原代肾近端小管上皮细胞 / BioVector® RPTEC Human Primary Renal Proximal Tubule Epithelial Cells

通用定义 / General Definition:BioVector® RPTEC 是直接从人类正常肾组织中分离提取的原代肾近端小管上皮细胞（Renal Proximal Tubule Epithelial Cells）。在肾脏生理学、毒理学和转运蛋白研究中，RPTEC 是最为核心的体外细胞模型。肾脏的近端小管负责重吸收绝大部分的肾小球滤过物（如葡萄糖、氨基酸、水和电解质），同时也是药物排泄和毒性损伤的主要靶部位。与永生化的肾细胞系（如 HK-2）相比，原代 RPTEC 能够更真实地保留体内近端小管上皮细胞的极性结构、纤毛生长特征、细胞间紧密连接以及关键药物转运体（如 OCT、OAT 和 P-gp）的天然表达水平，是评估药物肾毒性的金标准模型。

BioVector® RPTEC represents primary human renal proximal tubule epithelial cells isolated directly from normal human kidney tissue. In renal physiology, nephrotoxicity screening, and transporter kinetics, RPTEC is the most biologically relevant in vitro model available. The proximal tubule is responsible for reabsorbing the vast majority of glomerular filtrates (glucose, amino acids, water, and electrolytes) and serves as the primary site for drug clearance and xenobiotic-induced injury. Compared to immortalized lines like HK-2, primary RPTEC cells much more accurately retain in vivo characteristics, including morphological polarity, primary cilia development, tight junction formations, and the physiological expression of critical drug transporters (such as OCTs, OATs, and P-gp). This makes it the gold-standard platform for predictive kidney toxicity assays.

BioVector® RPTEC 技术参数 (Technical Specifications)

1. 细胞与形态生物学特征

• 组织来源： 人类正常肾皮质组织。

• 形态特征： 典型的上皮样（Epithelial-like）。在汇合达到单层时，细胞呈现规则的、规则排列的鹅卵石样（Cobblestone）结构，并在成熟后能够形成圆顶状结构（Domes），这是上皮细胞具备活跃的主动跨膜转运和液体输送能力的标志。

• 特定生物标志物：

  • 细胞角蛋白表达： Cytokeratin 18, Cytokeratin 19 强阳性。

  • 近端小管特异性标志物： E-cadherin 阳性，近端小管刷状缘标志物 CD10 (Neprilysin) 阳性，以及 Aquaporin-1 (水通道蛋白-1) 阳性。

  • 阴性标志物： 血管内皮细胞标志物 (von Willebrand Factor / CD31) 阴性，成纤维细胞标志物阴性。

2. 培养与分化条件

• 推荐专用培养基： 必须使用专用的无血清、添加多种生长因子的近端小管上皮细胞培养基系统（例如含有 Epidermal Growth Factor, Hydrocortisone, Epinephrine, Insulin, Triiodothyronine, Transferrin 的 REGM 培养基）。

• 血清限制： 通常在无血清（Serum-free）或极低血清（小于 0.5%）的环境下维持，因为常规高浓度血清（如 10% 胎牛血清）会迅速诱导原代上皮细胞发生去分化，甚至刺激背景中微量污染的成纤维细胞过度生长。

• 培养表面支持： 为了促进细胞形成完美的极性结构，建议使用涂布有 Collagen I (I 型胶原蛋白) 的培养皿，或者在 Transwell 膜上进行双层流体培养。

• 培养环境： 37 摄氏度，5% 二氧化碳。

• 传代特性： 作为原代细胞，其增殖能力有限。通常建议在细胞达到 80% 到 90% 汇合时使用低浓度的胰蛋白酶（如 0.05% Trypsin-EDTA）进行温和消化传代。通常在体外可以稳定维持 3 到 5 代（Passages），超出后细胞会表现出衰老、增大并丢失转运体功能。

主要科研应用 (Research Applications)

1. 体外药物肾毒性评价 (Predictive Nephrotoxicity)

• 急性肾损伤模型： 评估临床候选小分子、抗生素（如氨基糖苷类、顺铂）以及造影剂对人肾细胞的急性毒性（通过检测细胞活力、LDH 释放以及早期肾损伤标志物 KIM-1 或 NGAL 的表达）。

2. 药物转运体与排泄动力学

• 转运体介导的药物相互作用 (DDI)： 研究药物如何通过 OAT1, OAT3 或 OCT2 进入 RPTEC 细胞，以及如何通过流出泵 P-gp 或 BCRP 排出体外。这是新药申报（FDA / NMPA）中确证药物肾脏清除机制的法定实验之一。

3. 肾脏疾病病理机制

• 肾纤维化： 利用 TGF-beta 刺激 RPTEC，模拟慢性肾病（CKD）过程中上皮细胞向间质细胞表型转变（EMT）的病理生理过程。

• 糖尿病肾病： 在高糖环境下培养 RPTEC，研究近端小管对葡萄糖重吸收超载导致的氧化应激和炎症反应。

实验操作注意事项 (Experimental Guidelines)

• 严格避免高代数使用： 原代细胞的性状随传代次数增加衰退极快。用于转运体功能实验或毒性评价时，务必使用 4 代以内的细胞。

• 消化时间严密监控： 原代 RPTEC 对胰蛋白酶较为敏感，过度消化会导致细胞膜受体受损或触发细胞贴壁失败。通常在室温或 37 摄氏度下消化 2 到 3 分钟，一旦观察到细胞变圆、轻振可脱落，必须立刻加入含有大豆胰蛋白酶抑制剂或微量血清的培养基终止消化。

• 冻存液配方： 建议使用专用的原代细胞无血清冻存液，或者使用 90% 完全培养基辅以 10% DMSO 的比例，利用程序降温盒在零下 80 摄氏度过夜后转入液氮。

技术指标 (Technical Data Summary)

注意 / Note: 在开展三维微流控芯片（Organs-on-a-chip）或肾脏芯片研究时，RPTEC 通常与人肾小球内皮细胞联合接种，以在体外完美重构具有流动剪切力的肾单位滤过结构。

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