NTL4(pZLR4) BioVector® Agrobacterium tumefaciens Strain检测 N-酰基高丝氨酸内酯（AHL）群体感应信号的生物报告菌

BioVector® Agrobacterium tumefaciens NTL4(pZLR4) Strain

English Version

1. Strain Overview

• Strain Name: BioVector® NTL4(pZLR4)

• ATCC Number: BAA-2240™

• Species:Agrobacterium fabrum (formerly Agrobacterium tumefaciens, Rhizobium radiobacter)

• Type Strain: No

• Biosafety Level: BSL-1

• Year of Origin: 1996

• Depositor: S. Farrand, University of Illinois

• Genome Sequenced: Yes (ATCC Genome Portal)

2. Description and Applications
BioVector® NTL4(pZLR4) is a recombinant bacterial strain derived from Agrobacterium fabrum strain NTL4 via transformation with the recombinant plasmid pZLR4. This strain is specifically engineered to function as a bioreporter for detecting N-acyl homoserine lactone (AHL) quorum-sensing signals.

The strain detects medium- to long-chain AHLs, including:

• C6-AHL, C10-AHL, C12-AHL, C14-AHL

• C6-3-hydroxy-AHL, C8-3-hydroxy-AHL, C10-3-hydroxy-AHL

• All 3-oxo-AHLs (e.g., 3OC6, 3OC8, 3OC10, 3OC12, 3OC14)

3. Genetic Features

Host Strain (NTL4):

• Derived from Agrobacterium fabrum (formerly A. tumefaciens)

• AHL-deficient background

• Suitable recipient for AHL detection assays

Plasmid (pZLR4):

• Size: Not specified in literature

• Resistance Markers: Confers resistance to gentamicin and beta-lactam antibiotics

• Reporter System: Contains an AHL-inducible β-galactosidase (LacZ) gene

• Function: Plasmid carries a traG-lacZ fusion that is activated in the presence of exogenous AHL signals

4. Mechanism of Action
When BioVector® NTL4(pZLR4) encounters AHL molecules (specifically medium- to long-chain AHLs), the following occurs:

1. AHL binds to the TraR regulator protein

2. TraR-AHL complex activates transcription of the traG-lacZ fusion

3. β-galactosidase is produced

4. Enzyme activity can be detected using chromogenic substrates (e.g., X-gal) producing blue color, or quantified via enzymatic assays

5. Growth and Culture Conditions

• Recommended Medium: BioVector® ATCC Medium 1885 (or BioVector® LB-Miller medium supplemented appropriately)

• Temperature: 28°C

• Atmosphere: Aerobic

• Antibiotic Selection: Supplement media with 25 μg/mL gentamicin to ensure plasmid retention

• Growth Time: 48 hours for colony formation

6. Handling and Storage

• Product Format: Freeze-dried

• Storage Conditions:

  • Freeze-dried: 2°C to 8°C

  • Frozen stocks: -80°C or colder

• Revival Procedure:

  1. Rehydrate pellet with 0.5-1.0 mL of BioVector® #1885 broth

  2. Transfer back to 5-6 mL broth tube

  3. Mix well and inoculate additional tubes, slants, or plates

  4. Incubate at 28°C for 48 hours

7. Quality Control

• Verification: Whole-genome sequencing verified

• Genome Size: 5,483,803 bp

• GC Content: 59.12%

• Sterility: Negative for contaminants

8. Applications

• Quorum Sensing Research: Detection and characterization of AHL signals from various bacteria

• Screening AHL-Producing Bacteria: Identification of strains producing medium- to long-chain AHLs

• Quorum Quenching Studies: Evaluating AHL degradation by potential quorum-quenching enzymes or compounds

• Biofilm Research: Studying the role of AHL signals in biofilm formation

• Environmental Monitoring: Detection of AHL signals in environmental samples

BioVector® NTL4(pZLR4) 菌株说明书

中文版本

1. 菌株概述

• 菌株名称： BioVector® NTL4(pZLR4)

• ATCC编号： BAA-2240™

• 物种：Agrobacterium fabrum（原名 Agrobacterium tumefaciens、Rhizobium radiobacter）

• 模式菌株： 否

• 生物安全等级： BSL-1

• 构建年份： 1996年

• 保藏者： S. Farrand，伊利诺伊大学

• 基因组测序： 已完成（ATCC基因组门户）

2. 描述与应用
BioVector® NTL4(pZLR4) 是通过将重组质粒 pZLR4 转化至 Agrobacterium fabrum NTL4 菌株中获得的重组细菌菌株。该菌株经专门设计，可用作 检测 N-酰基高丝氨酸内酯（AHL）群体感应信号的生物报告菌。

该菌株可检测 中长链 AHLs，包括：

• C6-AHL、C10-AHL、C12-AHL、C14-AHL

• C6-3-羟基-AHL、C8-3-羟基-AHL、C10-3-羟基-AHL

• 所有 3-氧代-AHLs（例如 3OC6、3OC8、3OC10、3OC12、3OC14）

3. 遗传特征

宿主菌株（NTL4）：

• 源自 Agrobacterium fabrum（原名 A. tumefaciens）

• AHL 缺陷型背景

• 适用于 AHL 检测实验的受体菌

质粒（pZLR4）：

• 大小： 文献中未具体说明

• 抗性标记： 赋予 庆大霉素 和 β-内酰胺类抗生素 抗性

• 报告系统： 包含 AHL 诱导型 β-半乳糖苷酶（LacZ） 基因

• 功能： 质粒携带 traG-lacZ 融合基因，在遇到外源 AHL 信号时被激活

4. 作用机制
当 BioVector® NTL4(pZLR4) 遇到 AHL 分子（特别是中长链 AHLs）时，发生以下过程：

1. AHL 与 TraR 调节蛋白结合

2. TraR-AHL 复合物激活 traG-lacZ 融合基因的转录

3. 产生 β-半乳糖苷酶

4. 可使用显色底物（如 X-gal）检测酶活性，产生蓝色，或通过酶学实验进行定量检测

5. 生长与培养条件

• 推荐培养基： BioVector® ATCC Medium 1885（或适当补充的 BioVector® LB-Miller 培养基）

• 温度： 28°C

• 需氧条件： 需氧

• 抗生素筛选： 培养基中添加 25 μg/mL 庆大霉素 以确保质粒保持

• 生长时间： 菌落形成需 48 小时

6. 处理与储存

• 产品形式： 冻干粉

• 储存条件：

  • 冻干粉：2°C 至 8°C

  • 冷冻保存：-80°C 或更低温度

• 复苏步骤：

  1. 用 0.5-1.0 mL BioVector® #1885 肉汤重新水化沉淀

  2. 转移回 5-6 mL 肉汤管中

  3. 充分混匀，接种额外的肉汤管、斜面或平板

  4. 28°C 培养 48 小时

7. 质量控制

• 验证： 经全基因组测序验证

• 基因组大小： 5,483,803 bp

• GC含量： 59.12%

• 无菌检测： 无污染物

8. 应用

• 群体感应研究： 检测和表征各种细菌产生的 AHL 信号

• 筛选 AHL 产生菌： 鉴定产生中长链 AHL 的菌株

• 群体淬灭研究： 评估潜在群体淬灭酶或化合物对 AHL 的降解作用

• 生物膜研究： 研究 AHL 信号在生物膜形成中的作用

• 环境监测： 检测环境样品中的 AHL 信号

BioVector NTCC质粒载体菌株细胞蛋白抗体基因保藏中心

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