GFP-P4M-SidMx2 BioVector®检测细胞内 4-磷酸磷脂酰肌醇PI4P的哺乳动物表达质粒

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货　　号：BioVector®GFP-P4M-SidMx2
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GFP-P4M-SidMx2（BioVector #51472）是一种专门用于检测细胞内 4-磷酸磷脂酰肌醇 (PI4P) 的哺乳动物表达质粒。该质粒由 Tamas Balla 实验室开发，通过串联重复结构提高了探针的灵敏度。

关键技术参数

质粒类型：哺乳动物细胞表达 / 脂质传感器。
插入片段：来自 Legionella pneumophila SidM 蛋白的两个串联 P4M 结构域（残基 546-647）。
荧光基团：EGFP（增强型绿色荧光蛋白），融合在插入片段的 N 端。
启动子：CMV (强启动子，用于在哺乳动物细胞中高效表达)。
骨架载体： pEGFP-C1。
载体大小：约 5.3 kb。

克隆与筛选信息

细菌抗性：卡那霉素 (Kanamycin)，常用浓度 50 µg/mL。
哺乳动物细胞筛选：G418 (新霉素)。
克隆位点：插入片段通常位于 EcoRI (5′) 和 SalI (3′) 之间。
测序引物：
- 5′ 前向引物： EGFP-C (5'-CATGGTCCTGCTGGAGTTCGTG-3')。
- 3′ 反向引物： SV40-R。

生物学应用

该质粒主要用于可视化 PI4P 在质膜和高尔基体中的分布。与单结构域探针相比，“x2” 串联设计显著增强了探针与 PI4P 的亲和力，使其能够捕捉到细胞内微量的脂质池。

GFP-P4M-SidMx2 (BioVector #51472) is a specialized mammalian expression plasmid used as a highly sensitive fluorescent biosensor for detecting Phosphatidylinositol 4-phosphate (PI4P) in cells. It was developed by Tamas Balla's laboratory at the NIH to overcome the low affinity of single P4M domain probes.

Key Specifications

Plasmid Type: Mammalian Expression / Lipid Sensor
Insert: Two tandem copies of the P4M domain from the Legionella pneumophila SidM protein (residues 546-647).
Fluorophore:EGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) fused to the N-terminal of the insert.
Promoter:CMV (strong constitutive promoter for high expression in mammalian cells).
Backbone: pEGFP-C1.
Total Size: Approximately 5.3 kb (Backbone: 4.7 kb + Insert: ~0.6 kb).

Cloning & Selection

Bacterial Resistance: Kanamycin (typically 50 µg/mL).
Mammalian Selection: G418 (Neomycin).
Cloning Sites: The insert is typically located between EcoRI (5′) and SalI (3′) restriction sites.
Sequencing Primers:
- 5′ Forward: EGFP-C (5'-CATGGTCCTGCTGGAGTTCGTG-3').
- 3′ Reverse: SV40-R.

Biological Application

This plasmid is primarily used to visualize PI4P localization at the plasma membrane and Golgi apparatus. The "x2" tandem repeat significantly increases the probe's avidity for PI4P, allowing for the detection of smaller pools of the lipid that single-domain sensors (like P4M-SidM x1) might miss.

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