pKUT-Tn5-Sm/Sp BioVector®革兰氏阴性菌基因组稳定整合自杀型转座子递送质粒载体

BioVector®pKUT-Tn5-Sm/Sp（通常也被称为 pUTmini-Tn5 Sm/Sp）是一种用于革兰氏阴性菌基因组稳定整合的自杀型转座子递送质粒。

• 全长： 约 7,386 bp。

• 载体骨架：pUT 骨架。含有 R6K 复制起始位点 (oriR6K)。该位点依赖pir

  • 蛋白（由 pir 基因编码）才能启动复制。由于大多数目标受体菌株不含 pir 基因，质粒进入受体后无法自我复制（即“自杀”），从而确保筛选出的抗性菌株均为转座子插入染色体的稳转株。

  • 转座酶 (Transposase)： 高活性转座酶基因 (tnp) 位于质粒骨架上，但在转座单元之外。这种设计保证了转座子一旦跳跃进基因组后，由于转座酶基因的丢失，插入位置将保持稳定，不会再次发生跳跃。

  • 动员位点： 包含 oriT（转移起始位点），可通过接合（Conjugation）方式从大肠杆菌供体菌株转移至目标细菌。

  2. 主要应用

  • 正向遗传学筛查： 用于构建随机插入突变库，以鉴定与特定表型（如固氮作用、光合作用等）相关的基因。

  • 基因组稳定整合： 可用于将外源基因或报告基因稳定整合到细菌染色体中，且在无抗生素压力下也能保持稳定。

  3. 常用菌株

  • 克隆与供体菌株： 必须使用表达pir蛋白的大肠杆菌，如 JM109 $\lambda

    $pir**、**S17-1$
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