TOM20-GFP，TOMM20-GFP BioVector®哺乳动物细胞线粒体外膜荧光标记质粒

BioVector® TOM20-GFP（或 TOMM20-GFP）质粒常用于哺乳动物细胞中的线粒体外膜（OMM）标记。该质粒将线粒体进口受体蛋白 Tom20 与绿色荧光蛋白（GFP）融合，使线粒体网络可视化。

• pFX-Tom20-EGFP (#174186)

  • 用途： 在哺乳动物细胞中高效表达线粒体靶向的 EGFP。

  • 载体骨架： pFX (哺乳动物表达载体)。

  • 启动子： CMV。

  • 筛选标记： 新霉素 (Neomycin/G418)。

  • 克隆位点： 5' XhoI / 3' BglII。

  
  

• TOM20-SBP-GFP (#120173)*

  • 特点： 包含截短的 Tom20（1-30 aa）作为靶向序列，并带有 SBP 标签，用于通过链霉亲和素控制线粒体定位。

  • 载体骨架： pEGFP-N1。

  • 筛选标记： 卡那霉素 (Kanamycin, 50 μg/mL)。

  
  

• 载体名称： pCMV3-N-GFPSpark。

• 插入基因： 人源 TOMM20 (NM_014765.4)。

• 荧光标签：GFPSpark®（一种改进的高亮度绿色荧光蛋白，激发/发射峰为 487/508 nm）。

• 抗性标记： 潮霉素 (Hygromycin) 用于稳定转染筛选；氨苄青霉素 (Ampicillin) 用于细菌培养。

• 序列验证： 包含 Kozak 共有序列以增强表达效率。

• 靶向信号 (MTS)： Tom20 的线粒体定位取决于其 N-端跨膜结构域 (TMD) 的适度疏水性和紧随其后的正电荷残基（如 Arg, Lys）。

• 分子量信息：

  • TOM20 蛋白： 约 145 个氨基酸，分子量约 16.3 kDa。

  • GFP 标签： 约 238 个氨基酸，分子量约 27 kDa。

  • 融合蛋白： 整体约 43-45 kDa。

  
  

4. 实验建议

• 转染建议： 建议在细胞达到 70-80% 汇合度时进行转染，常用转染试剂如 Lipofectamine 或 FuGENE 6。

• 检测条件：

  • 激发光： ~488 nm。

  • 发射光： ~507-510 nm。

  
  

• 测序引物： 常用的测序引物包括 CMV-Forward 和 BGH-Reverse。

• pFX-Tom20-EGFP (BioVector #174186)

  • Purpose: High-level expression of Tom20 fused to EGFP.

  • Backbone: pFX (Mammalian Expression).

  • Total Size: 4,800 bp.

  • Selectable Marker: Neomycin (G418).

  • Promoter: CMV.

  
  

• mPA-GFP-TOMM20-N-10 (BioVector #57158)

  • Purpose: Photoactivatable GFP (mPA-GFP) for dynamic mitochondrial imaging.

  • Localization: Outer Mitochondrial Membrane.

  • Excitation/Emission: 400/504 nm and 515/517 nm.

  
  

• TOM20-SBP-GFP (BioVector #120173)*

  • Insert: Truncated TOM20 (aa 1-30) fused to SBP and eGFP.

  • Tag: C-terminal eGFP.

  
  

• Vector: pCMV3-N-GFPSpark.

• Insert: Human TOMM20 (NM_014765.4).

• Marker: Hygromycin resistance for stable cell line selection.

• Features: Includes a Kozak consensus sequence to enhance expression.

3. Key Molecular Properties

• TOM20 Gene (TOMM20): Encodes a 145 amino acid protein (approx. 16.3 kDa).

• Targeting Signal: The N-terminal transmembrane domain (TMD) of Tom20 is responsible for anchoring to the mitochondrial outer membrane.

• GFP Tag: Standard GFP is approximately 27 kDa, consisting of 238 amino acids.

• Promoter: Most mammalian versions use the CMV promoter for constitutive expression.

• Bacterial Selection: Typically Ampicillin (100 μg/mL).

• Common Primers: T7 (TAATACGACTCACTATAGGG) and BGH Reverse (TAGAAGGCACAGTCGAGG) are often used for sequencing.

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