HEK293T CAGA12-Luc/TK Renilla BioVector®监测Activin和TGF-β（转化生长因子-β）信号通路的稳定双荧光素酶报告细胞系

BioVector® HEK293T CAGA12-Luc/TK Renilla 是一种专门用于监测 Activin 和 TGF-β（转化生长因子-β）信号通路的稳定双荧光素酶报告细胞系。

• 物种： 人源（Human）。

• 组织来源： 胚胎肾脏（Fetal Kidney）。

• 细胞类型： 上皮细胞（贴壁生长）。

• 生物安全等级： BSL-2。

• 倍增时间： 约 12–20 小时。

• 主报告基因 (CAGA12-Luc)： 含有 12 个重复的 CAGA 盒（源自 PAI-1 启动子），该序列能特异性结合 Smad3/Smad4 复合物。当 TGF-β 或 Activin 激活信号通路时，细胞会表达萤火虫荧光素酶（Firefly Luciferase）。

• 内参报告基因 (TK-Renilla)： 由组成型 胸苷激酶 (TK) 启动子 驱动，持续表达海肾荧光素酶（Renilla Luciferase）。用于校正细胞数量、活力及实验孔间的误差。

• 筛选抗性：

  • Puromycin (嘌呤霉素)： 用于维持 CAGA12-Luc 的稳定性。

  • Blasticidin (杀稻瘟菌素)： 用于维持 TK-Renilla 的稳定性。

  
  

• 培养基： DMEM 高糖培养基，添加 10% 胎牛血清 (FBS/FCS)。

  培养环境： 37°C，5% CO2

• • 生长特性： 贴壁生长；在优化条件下倍增时间约为 12–20 小时。

  • 生物安全等级：BSL-2。

  检测原理 (Assay Mechanism)

  1. 诱导： 当加入 TGF-β 或 Activin 时，Smad3 和 Smad4 结合形成复合物，并结合到 CAGA12 启动子区域。

  2. 表达： 结合后触发萤火虫荧光素酶的表达。

  3. 标准化： 使用双荧光素酶报告基因检测系统同时读取两种信号。通过萤火虫荧光素酶与海肾荧光素酶的比值，可以消除细胞活力、接种误差以及非特异性药物反应带来的干扰。

  

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  The BioVector® HEK293T CAGA12-Luc/TK Renilla cell line (Catalog #: 156438) is a specialized reporter cell line designed to monitor Activin and TGF-beta (TGF-β) signaling. It utilizes a dual-reporter system for high-sensitivity measurements and internal normalization.
  Core Specifications

  • Host Cell Line:HEK293T (Human Embryonic Kidney), an adherent line known for high transfection efficiency.

  • Reporter 1 (Inducible):CAGA12-Luc. A Smad3/Smad4-dependent Firefly luciferase reporter containing 12 copies of the CAGA box (AGAC motif) from the PAI-1 promoter. It responds to Activin and TGF-β signaling.

  • Reporter 2 (Constitutive):TK Renilla. A Renilla luciferase reporter driven by the thymidine kinase (TK) promoter, used as an internal control for normalization.

  • Selection Markers:Puromycin (conferred by pRetroSuper) and Blasticidin (conferred by pCMV-Bsd).

  • Application: Monitoring of Smad-dependent signal transduction pathways and screening for TGF-β/Activin pathway agonists or antagonists.

  Culture Conditions

  • Growth Medium: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) supplemented with 10% Fetal Calf Serum (FCS).

  • Storage: 1x10^6 cells/vial, typically stored in liquid nitrogen vapor phase for long-term stability.

  • Growth Characteristics: Adherent; doubling time is approximately 12–20 hours under optimal conditions.

  • Biosafety Level:BSL-2.

  Assay Performance

  • Mechanism: In the presence of Activin or TGF-β ligands, Smad3/4 complexes bind to the CAGA12 promoter, triggering the expression of Firefly luciferase.

  • Normalization: The Renilla luciferase signal provides a baseline for cell viability and transfection efficiency, allowing for "dual-luciferase" normalization.

  • Sensitivity: Capable of detecting minute moles of reporter protein with a linear range extending over 7 logs.

  BioVector NTCC质粒载体菌株细胞蛋白抗体基因保藏中心

  E-mail:biovector@163.com

  电话:400-800-2947

  工作QQ/微信同号:1843439339

  网址 www.biovector.net

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