首页 » Y190 Yeast strain/Competent cells酵母菌株/感受态细胞 BioVector NTCC质粒载体菌种细胞基因保藏中心

Y190 Yeast strain/Competent cells酵母菌株/感受态细胞 BioVector NTCC质粒载体菌种细胞基因保藏中心

  • 价  格:¥19865
  • 货  号:BioVector's Y190 Competent Cells
  • 产  地:北京
点击询问我要采购
 竭诚为您服务!
BioVector NTCC典型培养物保藏中心
联系人:Dr.Xu, Biovector NTCC Inc.

电话:400-800-2947 工作QQ:1843439339 (微信同号)

邮件:Biovector@163.com

手机:18901268599

地址:北京

已注册
 
Y190 Yeast strain/Competent cells酵母菌株/感受态细胞

BioVector's Y190菌株是BioVector NTCC Inc.开发的GAL4系统酵母双杂实验用菌株,MATa型。

产品规格 (CAT#: BioVector-YC1070)

BioVector's Y190 Competent Cell: 100μl/支 保存: -80℃(3个月)


BioVector's pGADT7 (control vector, 10 ng/μl) 10μl 保存:-80℃(12个月)

Carrier DNA (10 μg/μl) 100μl 保存:-20℃(12个月)

PEG/LiAC: 5ml 保存: 4℃(12个月)


基因型

MATa, ura3-52, his3-200, ade2-101, lys2-801, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, cyhr2, LYS2 : : GAL1


UAS-HIS3TATA-HIS3, MEL1 URA3 : : GAL1UAS-GAL1TATA-lacZ



产品说明

Y190菌株是Clontech公司开发的GAL4系统酵母双杂实验用菌株,MATa型,可直接转化质粒或与MATα型酵母菌株BioVector's Y187通过mating操作进行蛋白互作验证或筛库试验。Transformation marker为: trp1,leu2,cyh2;报告基因为: lacZ,HIS3,MEL1。Y190-GAL4酵母双杂系统需要两种质粒配套使用:(BioVector's pGB和BioVector's pACT2)或(BioVector's pGBKT7和BioVector's pGADT7)。质粒pGB由pGBKT7改造而来,筛选标志为TRP1,用于表达DNA-BD(来自酵母转录因子GAL4N端1~ 174位氨基酸)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白;质粒pACT2与pGADT7的结构和功能类似,筛选标志为LEU,用于表达AD(GAL4 C端768~881位氨基酸)与目标蛋白 (Prey)的融合蛋白。GAL4系统原理:一个完整的酵母转录因子GAL4可分为功能上相互独立的两个结构域:位于N端1~174位氨基酸区段的DNA结合域 (DNA-BD)和位于C端768~881位氨基酸区段的转录激活域(AD)。DNA-BD能够识别GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS,并与之结合。而AD可以启动UAS下游的基因进行转录。BD和AD单独存在不能激活转录,但当二者接近时,则呈现完整的GAL4活性,使含有UAS的启动子下游基因转录表达。正常条件下,BD不与AD结合,将要检测的蛋白质分别与BD和AD融合,形成 bait融合蛋白(bait –BD)和 prey融合蛋白 (prey-AD),如果 bait和 prey发生相互作用,就会促使 BD和 AD的相互接近,形成完整的GAL4,从而激活报告基因的转录。BioVector's Y190感受态细胞经特殊工艺制作,-80℃可保存三个月,BioVector's pGADT7质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA。




操作方法

1. Carrier DNA 在每次使用前要通过加热处理使其变性为单链状态,步骤如下:Carrier DNA 放95℃水浴或金属浴3 min,快速插入冰中,静置3 min,再次放95℃水浴或金属浴3 min,快速插入冰中,静置3 min以上。

2. 取100 µl冰上融化的BioVector's Y190感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒0.5-3 µg,Carrier DNA10 µl,PEG/LiAc 500 µl并吸打几次混匀,30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。

3. 将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。

4. 5000 rpm离心 40 s弃上清,ddH2O 400 µl 重悬,离心 30s弃上清。

5. ddH2O 50 µl重悬,涂板,29℃培养48-96 h。









注意事项


1. 感受态细胞最好在冰上融化。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. 同时转化2-3种质粒时应增加质粒的用量。

4. BioVector's Y190酵母菌株对高温敏感,最适生长温度为27-30℃;高于31℃,生长速度和转化效率呈指数下降。

5. 菌落变粉不是污染,是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后,平板上的Adenine被酵母消耗完毕,酵母试图通过自身代谢途径合成Adenine以供利用,然而,有些菌株的ADE2基因被破坏,Adenine合成途径受阻;又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常,所以造成中间产物P-ribosylamino imidazole (AIR) 在细胞中积累而使菌落变为粉红色。

6. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢,培养基中缺陷成分越多,生长越慢,以转化涂板为例:涂YPDA平板29℃,48 h培养可见直径1 mm克隆;涂SD单缺平板29℃,48-60 h培养可见直径1 mm克隆,涂SD双缺平板29℃,60-80 h培养可见直径1 mm克隆,涂SD三缺或四缺平板平板29℃,80-90h培养可见直径1 mm克隆。

Supplier来源:BioVector NTCC Inc.
TEL电话:400-800-2947
Website网址: http://www.biovector.net

您正在向 biovector.net  发送关于产品 Y190 Yeast strain/Competent cells酵母菌株/感受态细胞 BioVector NTCC质粒载体菌种细胞基因保藏中心 的询问

点击“立即发送”后,我们将在1个工作日内与您取得联系。