NanoLuc萤光素酶技术

价　　格：¥2930
货　　号：BioVector-NanoLuc
产　　地：北京

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NanoLuc萤光素酶是Promega公司推出一种新型的萤光素酶，它具有分子量更小(19.1kDa， 171个氨基酸)，发光更亮，比任何现有的生物发光酶用途更加广泛的特点，它是目前性能最好的生物发光报告基因之一。NanoLuc™萤光素酶的这些属性为报告基因检测提供了新的功能，在需要更高灵敏度的复杂生物学应用中深具潜力。

　　NanoLuc技术包含一种新型底物 ――furimazine和一种独特的酶(NanoLuc™萤光素酶)，前者由Promega公司有机化学家开发，后者由Promega公司的研究科学家利用定向进化技术开发。它具有无可比拟的小巧体积，可以用于增强的病毒传递和蛋白融合，而且它很容易从细胞中分泌。NanoLuc™萤光素酶比萤火虫(Photinus pyralis)或海肾(Renilla reniformis)萤光素酶的发光高两个数量级，在难转染的细胞中也能获得更好表现。此外，NanoLuc可应用在更多生理相关模型中，包括复杂的生物样品。NanoLuc萤光素酶简单易用――仅需加样-检测，且信号稳定，可以不经任何改良，实现从实验台操作到高通量筛选的规模放大应用。

　　为满足在“下一代”遗传报告基因中的多种应用需求，我们提供12个版本的 NanoLuc萤光素酶质粒。产品包括NanoLuc-PEST(NlucP)，它将蛋白表达水平变化与转录活性改变密切偶联，并增加信噪比。对于分泌型报告基因，我们通过融合N-末端分泌信号(secNluc)来制备NanoLuc萤光素酶载体。使用Nano-Glo™萤光素酶检测试剂，发光量在跨越 1,000,000倍的浓度范围内呈线性关系，且信号半衰期≥2小时。

　　手机拍摄的NanoLuc™萤光素酶发光信号。(注：96-孔板中，转染了NanoLuc™萤光素酶载体的HEK293细胞，50000细胞/孔)

　　NanoLuc萤光素酶具有许多使之成为出色报告基因蛋白的物理特性。

说明		NanoLuc™ (Nluc) luciferase （ NanoLuc™ 萤光素酶）是一个经过基因工程改造的小分子酶（ 19.1kDa ），它是目前性能最好的生物发光报告基因。该酶比萤火虫（ Photinus pyralis ）或海肾（ Renilla reniformis ）萤光素酶的发光亮 100 倍，它使用一种新型底物 ——furimazine，可产生高强度、辉光型发光。生物发光反应不依赖 ATP ，同时抑制背景发光以获得最高检测灵敏度。目前已构建多种类型的 NanoLuc™ 萤光素酶报告基因载体，以满足不同的实验需求。非融合的 Nluc 提供了最大的光输出和灵敏度， NanoLuc™-PEST （ NlucP ）将蛋白表达水平变化与转录活性改变密切偶联，并增加信噪比，融合 N- 末端分泌信号（ secNluc ）的 NanoLuc™ 萤光素酶适用于分泌型报告基因试验。使用 Nano-Glo™ 萤光素酶检测试剂，发光量在跨越 1,000,000 倍的酶浓度范围内呈线性关系，且信号半衰期 ≥2 小时。
特点		NanoLuc 萤光素酶具有许多使之成为出色报告基因蛋白的物理特性： • 分子量非常小，单体酶（ 171 个氨基酸； 513bp ） • 热稳定性高（ T m =60 ℃） • 在很宽的 pH 范围内有活性（ pH 值 6-8 ） • 没有翻译后修饰或二硫键 • 均匀分布在细胞中 • 发射光谱非常适合于生物发光共振能量转移（ BRET； λmax =465nm ）。为满足利用报告基因研究转录调控，我们提供多种表达不同类型 NanoLuc ™萤光素酶（非融合 Nluc ， PEST 不稳定型 NlucP ，分泌型 secNluc ）的质粒载体。不同的 pNL 突变体用途如下： • pNL1 ：克隆已知或预测的启动子区域 • pNL2 ：克隆已知或预测的启动子区域，并通过潮霉素（ Hygromycin ）筛选建立一个稳定克隆的细胞系 • pNL3 ：克隆不需要基本启动子的结合位点或应答原件（如 pNL3.2.NF-κB-RE 载体） • 提供非融合和分泌型 Nluc 对照质粒。 pNL 载体系列以 pGL4 为基础设计，以方便从现有的质粒上进行序列转移。载体骨架设计还去掉了许多转录因子结合位点和其他潜在的调控元件以减少反常结果的发生。对 Nluc 基因突变体进行了密码子优化，并去除了许多潜在调控元件或其他不必要的功能（如常见的限制性内切酶位点）。
操作手册		pNL3.2.NF-κB-RE[ NlucP /NF-κB-RE/Hygro] Vector Product Information
相关产品		FuGENE® HD Transfection Reagent FuGENE® 6 Transfection Reagent pGEM®-3Zf(+/–) Vectors GloMax® 96 Microplate Luminometer GloMax®-Multi+ Detection System with Instinct™ Software
应用		• 转录调控。 • 病毒 - 细胞的相互作用。 • 化合物筛选。 • 翻译后修饰。 • G 蛋白偶联受体信号。 • 细胞信号。 • 启动子分析。
储存条件		储存于 –20°C 。

Nano-Glo® Luciferase Assay System provides a simple, single-addition reagent that generates a glow-type signal in the presence of NanoLuc® luciferase. The reagent is prepared by mixing Nano-Glo® Luciferase Assay Substrate and Nano-Glo® Luciferase Assay Buffer and contains an integral lysis buffer to use directly on cells expressing NanoLuc® luciferase or culture medium when the luciferase is secreted.
NanoLuc® (Nluc) luciferase is a small (19.1kDa) engineered luminescent reporter. The enzyme is about
150-fold brighter than either firefly (Photinus pyralis) or Renilla reniformis luciferase, using a novel coelenterazine analog (furimazine) to produce high intensity, glow-type luminescence. The luminescent reaction is ATP-independent and designed to suppress background luminescence for maximal assay sensitivity.