犹他游动放线菌(A.utahensis NRRL 12052) strain菌株菌种 BioVector NTCC质粒载体菌种细胞基因保藏中心

犹他游动放线菌(A.utahensis NRRL 12052) strain菌株菌种 BioVector NTCC质粒载体菌种细胞基因保藏中心
米卡芬净和阿尼芬净的合成过程均包含一步由犹他游动放线菌(Actinoplanes utahensis NRRL12052)执行的脱酰化反应,该反应由棘白霉素脱酰酶(ECB脱酰酶)催化。棘白菌素类抗真菌药物米卡芬净和阿尼芬净的合成工艺中包括一个关键步骤:水解除去FR901379分子和棘白菌素B(echinocandin B, ECB)分子的脂肪酸侧链, 形成环状的6元多肽核心.FR901379和ECB的水解可以分别被FR901379酰基酶和阿库来菌素A酰基酶(aculeacin A acylase, AAC)催化, 因此, FR901379酰基酶和AAC的发掘、表征和生产在米卡芬净和阿尼芬净的工业生产上具有重要的应用价值.本研究首先筛选到了犹他游动放线菌SW1311, 发现该菌株发酵液具有酰基酶活性, 并摸索了不同发酵条件对酰基酶活性的影响.然后将犹他游动放线菌SW1311中的AAC基因克隆到改造过的质粒载体pIJ8660中, 并将该质粒转化到天蓝色链霉菌(Streptomyces coelicolor)A3(2) 中对AAC基因进行高表达, 得到重组菌株sSCO-AAC.最后将sSCO-AAC生产的AAC活性和所需培养时间与犹他游动放线菌SW1311进行比较, 表征了sSCO-AAC的发酵液水解FR901379的反应.结果表明, 犹他游动放线菌SW1311中的酰基酶具有水解FR901379和青霉素Ⅴ的酰基活性.用重组菌株sSCO-AAC生产的AAC活性比犹他游动放线菌SW1311的高4.6倍, 且该重组菌株所需的培养时间比犹他游动放线菌SW1311缩短了30%.该结果不仅将ACC的应用范围从阿尼芬净合成拓宽到了米卡芬净合成, 而且还揭示出天蓝色链霉菌A3(2) 可以作为一个良好的AAC表达菌株.本研究对阿尼芬净和米卡芬净的工业化生产具有潜在的应用价值.
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