pCDNA6.2-GW/EmGFP-miR-Control质粒

pCDNA6.2-GW/EmGFP-miR-Control质粒
启动子: CMV promoter 复制子: pUC Ori,F1 Ori,SV40 Ori 终止子: HSV TK poly(A) signal 质粒分类: 哺乳细胞质粒；哺乳编辑质粒；干扰RNA质粒 质粒大小: 5759bp 原核抗性: 壮观霉素Spe 筛选标记: 杀稻瘟菌素Blast 克隆菌株: DH5α等大肠杆菌 培养条件: 37℃，有氧，LB 表达宿主: 293T等哺乳细胞 培养条件: 37℃，有氧，5%CO2 诱导方式: 无需诱导 5'测序引物: pEGFP-C-5 3'测序引物: HSVtk-pA-R：GTCTCCTTCCGTGTTTCAG 备注: 可连入miRNA片段 质粒简介 pCDNA6.2-GW/EmGFP-miR-Control荧光miRNA报告质粒，带有CMV启动子和EGFP绿色荧光蛋白基因，gateway技术兼容，带有壮观霉素Spe原核抗性，杀稻瘟菌素Blast细胞筛选标记。
pCDNA6.2-GW-EmGFP-miR-Control质粒是在pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR线性化载体的基础上连入了一个小片段而成。如果需要连入其它miRNA片段，可通过引物退火加酶切连接的方式连入。 转染后可立即表达 miRNA。 所表达的 miRNA 在核内经内源细胞机制（包括 Drosha 酶）加工后，转运至细胞质，由 Dicer 酶进一步加工）。 然后，完成加工的 miRNA 结合到 RISC，在此处其功能类似于 siRNA，使 mRNA 靶标被切割。 带有 EmGFP 的 BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi 表达载体试剂盒将传统 RNAi 载体的优点（表达稳定并能够使用病毒导入）以及组织特异性表达和同一转录本多靶点抑制的功能集于一身。 带有 EmGFP 的 BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi 表达载体试剂盒含有的 pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR 载体设计用于表达人工 miRNA，该 miRNA 经工程化改造，与目的基因序列有 100% 的同源性并能引起靶标分子的切割。 该载体包括内源性 miRNA 的侧翼序列和环序列，内源性 miRNA 可指导从较长的 Pol II 转录本 (pre-miRNA) 上切除工程化的 miRNA。 使用 一流的 BLOCK-iT RNAi Designer，超过 70% 的重组体能产生超过 70% 的抑制效率。 工程化 miRNA 的 Pol II 表达可实现： 在 CMV 即刻早期启动子作用下高效表达，可通过 MultiSite Gateway重组选择组织特异性启动子和其它受调控的启动子； 在 pcDNA™6.2-GW/EmGFP-miR 载体中同-顺反子表达 Emerald GFP (EmGFP) 报告基因，使 EmGFP 的表达与目的 miRNA 抑制活性之间具有极强的相关性； 与用于基因表达的多种 Invitrogen Gateway® 目的 (DEST) 载体兼容；包括用于稳定转导分裂细胞、非分裂细胞和原代细胞类型的慢病毒载体，用于染色体单位点整合的 Flp-In™ 系统，以及替代报告基因融合构建体； 可在同一转录本表达的工程化 miRNA 多于一种，从而可同时抑制多个基因并产生合成表型；

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