BioVector® CCLF_PEDS_0051_T 人神经母细胞瘤细胞 (Human Neuroblastoma Cell Line

• 细胞名称：BioVector® CCLF_PEDS_0051_T (人神经母细胞瘤细胞)

• DSMZ 编号： ACC 972

• 物种： 人 (Homo sapiens)

• 细胞类型： 神经母细胞瘤 (Neuroblastoma)

• 背景来源： 该系于2021年建立，取材自一名2岁患有未经治疗的转移性神经母细胞瘤男童的胸腔。内部识别码为 PEDS195T_4_PF。

• 生物安全等级： 1级

• 分发限制： A (常规分发)

• 细胞形态： 贴壁生长，表现出两种不同比例的形态：带有长突起的神经元样细胞，以及巨大的扁平上皮样细胞（可能为衰老细胞）。

• 培养基： 50% Advanced DMEM/F12 + 50% DMEM 高糖，添加 7.5% 热灭活 FBS，以及 10 ng/ml EGF、5 ug/ml 胰岛素、0.5 ug/ml 氢化可的松、8.6 ng/ml 霍乱毒素、10 uM Y-27632。

  • 重要提示：EGF 和 Y-27632 必须在培养前现加。

  
  

• 传代培养： 在 T75 瓶中接种约 1 x 10的6次方个细胞。

  • 操作细节： 先用 D-PBS 清洗，使用 Accutase 消化（最长10分钟）。

  • 传代比例： 每 6-14 天按 1:2 传代，维持密度在 0.3-0.6 x 10的6次方/T75瓶。

  • 特别警示：该细胞系寿命可能有限。 约 5 代后巨大的衰老细胞会占据主导。强烈建议建立原始种子库 (Master Bank) 和工作细胞库 (Working Bank)。

  
  

• 培养条件： 37 摄氏度，5% CO2 (二氧化碳)。

• 倍增时间： 约 5-14 天。

• 收获密度： 最大密度约为 0.8 x 10的5次方/平方厘米。

• 冻存条件： 使用 Recovery Cell Culture Freezing Medium 进行冻存。

• 细胞遗传学： SNP 阵列显示 1q 增益、10p 缺失以及 11p 拷贝数中性杂合性丢失 (LOH)。

• 分子遗传学：缺乏 MYCN 基因扩增；TRAP 检测结果为阴性。

• 鉴定/真实性： STR 分析符合 ANSI/ATCC 全球标准。

• 支原体检测： PCR 检测结果为阴性。

• 病毒检测： PCR 检测显示 EBV, HBV, HCV, HIV-1/2, HTLV-1/2, MLV 均为阴性。

• Cell Name:BioVector® CCLF_PEDS_0051_T (Human Neuroblastoma Cell Line)

• DSMZ No.: ACC 972

• Species: Human (Homo sapiens)

• Cell Type: Neuroblastoma

• Origin: Established in 2021 from the pleural cavity of a 2-year-old boy diagnosed with untreated metastatic neuroblastoma (Internal CCLF ID: PEDS195T_4_PF).

• Biosafety Level: 1

• Permissions: A

• Morphology: Adherent cells with two morphologies: neuronal-like cells (long extensions) and large flat epitheloid cells (likely senescent).

• Medium: 50% Advanced DMEM/F12 + 50% DMEM high glucose, supplemented with 7.5% h.i. FBS, 10 ng/ml EGF, 5 ug/ml insulin, 0.5 ug/ml hydrocortisone, 8.6 ng/ml cholera toxin, and 10 uM Y-27632.

  • Note:EGF and Y-27632 must always be added fresh.

  
  

• Subculture: Seed 1 x 10 to the 6th cells in a T75 flask; split 1:2 every 6-14 days using Accutase (up to 10 min; wash with D-PBS first).

  • CAVEAT:This cell line likely has a limited lifespan. Large senescent cells become dominant after about 5 passages. Master and working cell banks are strongly recommended.

  
  

• Incubation: 37 degrees Celsius with 5% CO2.

• Doubling Time: Approximately 5-14 days.

• Harvest Yield: Maximum density of approx. 0.8 x 10 to the 5th/cm2.

• Storage: Frozen with Recovery Cell Culture Freezing Medium.

• Cytogenetics: SNP array indicates chr1q gain, chr10p loss, and copy-neutral LOH of chr11p.

• Molecular Genetics:Lacks MYCN amplification; negative in TRAP assay.

• Authenticity: STR analysis according to ANSI/ATCC ASN-0002.1-2021 confirms an authentic profile.

• Mycoplasma: Negative via PCR assay.

• Viruses: Negative for EBV, HBV, HCV, HIV-1, HIV-2, HTLV-1/2, and MLV via PCR.

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